人骨形态发生蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达！.PDFVIP

中国生物工程杂志 ， ， （）： :@? +CRGD:@C=CAH (8 (8 # 7 K 8 人骨形态发生蛋白 （ ） ! #$%! 在巴斯德毕赤酵母中的表达! 梁东春 左爱军 王宝利 郭 刚 张镜宇!! （天津市内分泌研究所 天津 !# ） 摘要 以重组质粒 $%’!#( 为模板 )* 扩增人 +,)’( 成熟肽编码序列，将该序列克隆入 $-.,’/ 载体进行 012 序列分析后亚克隆入分泌型毕赤酵母表达载体 $)345 中。重组质粒 经 酶切后回收线性化片段，聚乙二醇法转染毕赤酵母菌株 。 筛选 $)345’!#( !$% 33 -6778 )* 整合有人+,)’( 基因的酵母细胞重组子，以甲醇进行诱导表达，于酵母细胞培养基中可检测到 9:+,)’( 。体外培养条件下，所得9:+,)’( 可增加(/! 小鼠成骨细胞内碱性磷酸酶活性；体内实 验， 冻干粉可于小鼠骨四头肌肌袋中诱导软骨细胞群产生。 9:+,)’( 关键词 人骨形态发生蛋白 （ ） 毕赤酵母 分泌表达 ( +,)’( 人骨形态发生蛋白 （ ）不但具有良好的 的重组质粒 ，大肠杆菌菌株 、 ’( :+,)’( $%’!# ’( P,74 (/! 诱导成骨活性，可作为成骨因子应用于骨组织工程 小鼠成骨细胞系为本实验室保存。酵母表达质粒 ［ ］ 领域，还是 7 K 8 7 种重要的发育调节因子 。基因工程 $)345，酵母菌株-6778 购自3@QR9CAG@ 公司。克隆 生产重组人 （ ）无论在临床应用还是 载体 购自 公司。 +,)’( 9:+,)’( $-.,’/ )9CJGA? 基础研究中都具有重要的意义。由于大肠杆菌无法 7O 7O( 酶和试剂 012 限制性内切酶 /(- 3， 进行某些真核蛋白活性所必需的翻译后加工，重组 ， ， 购自 大连有限 0’-1 3 !$% 33 /;012 SA?TG /?5?*? 蛋白又往往以不溶的形式出现在包涵体中。若选用 公司，去糖基化酶)1-?TG N 购自+C=?UT 公司。抗 大肠杆菌表达系统，必须对包涵体进行后期处理才 坏血酸 （ ）购自 公司。 蛋白 2TDC9UD ?DB 6AJ? +2 能获得有生物活性的9:+,)’(。本实验室曾在昆虫 浓度测定试剂盒购自)G9DG 公司，碱性磷酸酶测定 细胞及中国仓鼠卵巢细胞 （ ）这两种真核细 LM DG== 试剂盒为天津市药物研究院产品。小鼠抗人+,)’