羧基二茂铁2脱氧核糖核酸探针的制备和.PDFVIP

第 33卷 分析化学 ( FENX I HUAXU E) 　研究简报 第 10期 　　　　　　 　　　　　 　　　　　　 　　　　　 2005年 10 月 Ch inese Journal of A nalytical Chem istry 1469 ～1472 羧基二茂铁 脱氧核糖核酸探针的制备和 脱氧核糖核酸分析的应用 1, 3 2 3 3 杨敏丽 　高楼军 　何品刚 　方禹之 1 (宁夏大学能源化工自治区重点实验室 ,银川 75002 1) 2 ( ) 3 ( ) 延安大学化学化工学院 ,延安 7 16000 　　 华东师范大学化学系 ,上海 200062 ( ) 摘 　要 　在偶联活化剂碳二亚胺的存在下 ,通过羧基二茂铁 FCA 上的羧基与 DNA 分子上的氨基共价键合 , 将 FCA 标记在氨基修饰的寡聚核苷酸片段上 ,制备成 FCA ssDNA 探针 。探针与固定在电极上的 ssDNA 在一 定的条件下进行杂交反应 ,测定杂交后 FCA 对 Lum ino lH O 体系的电致化学发光催化信号 ,从而对 目标 2 2 ssDNA 进行序列识别及含量测定 。实验结果表明 ,该探针能够很好的识别三碱基错配序列 ,对完全互补序列 的响应可以达到 5 ×10 - 11 mol/L 。 关键词 　羧基二茂铁 ,鲁米诺 , 电致化学发光 ,脱氧核糖核酸探针 1　引　　言 ( ) 电致化学发光 ECL 是一种高灵敏度的检测方法 ,近几年在生物分析领域引起人们 的极大关 [ 1～6 ] ( ) 注 。鲁米诺 Lum ino l 是一种很好的 ECL 活性物质 ,但 由于缺乏合适的功能团来直接标记生物大 ( ) 分子而使其应用受到一定限制 。在 Tris体系中 ,羧基二茂铁 FCA 可以催化 Lum ino l与 H O 的 ECL 反 2 2 应 ,方法测定 FCA 的检出限可达 1. 5 ×10 - 9 mo l/L [ 7 ] 。根据这个特点 ,本研究用 FCA 来标记已知序列的 ssDNA 片段 ,制备成 FCA ssDNA ECL 探针 ,与固定在电极上的 ssDNA 进行杂交反应 ,测定杂交后电极上 的 FC