第8章微生物遗传变异与育种课件.pptVIP

常用的菌种保藏的方法： 1、斜面菌种低温保藏法---把斜面菌种、固体穿刺培养物或菌悬液等，直接放入4～5℃冰箱中。保藏时间一般不超过3个月，到时必须进行移接传代，再放回冰箱。 2、砂土管保藏法---将干燥砂粒与细土混合后灭菌制成砂土管，然后接种保藏 。若把砂土管放在低温或抽气后密封，效果更佳。此法适用于产孢子及芽孢菌种的保藏。保藏期1～10年。 3、石蜡油封藏法---向培养好的菌种斜面上加入灭菌石蜡油，高出斜面1cm，然后蜡封管口，立放在冰箱中。该法既可防止培养基水分蒸发，又能使菌种与空气隔绝。保藏期1～2年 。 4、真空冷冻干燥法---在低于-15℃下，快速将细胞冻结，并保持细胞完整，然后在真空中使水分升华致干。使生长代谢暂时停止，不易发生变异，可长时间保存，一般为5～10年，最多可达15年。 实例：我国1979年7月成立中国微生物菌种保藏管理委员会(CCCCM) ，亚洲第一，有14000余株各种微生物，三种保藏方法（斜面．冻干．液氮）。 ATCC仅采用两种最有效的方法，即保藏期5～15年的冷冻干燥保藏法和20年以上的液氮保藏法，以最大限度地减少传代次数和避免菌种衰退。 保藏措施:当菌种保藏单位收到合适菌种时，先将原种制成若干液氮保藏管作为保藏菌种；然后再制一批冷冻干燥保藏菌种作为分发用。经5年后，假定第1代(原种)的冷冻干燥保藏菌种已分发完毕，就再打开一瓶液氮保藏原种。至少在20年内，凡获得该菌种的用户，至多只是原种的第2代，可以保证所保藏和分发菌种的原有性状。 本章小节 1.证明遗传物质基础的三个经典实验 2.遗传物质在细胞内的存在7个水平。 质粒、类型及其特性。 3.基因突变、类型、特点及DNA损伤的修复。 4.诱变育种的8项指导原则 5.基因重组：原核生物的4种：转化、转导、接合、原生质体融合。 6菌种的衰退、复壮和保藏。 ②流产普遍转导p220 概念：简称流产转导（abortive transduction）。经转导获得供体菌DNA片段的受体菌，如果外源DNA在其内既不进行交换、整合和复制，也不迅速消失，而仅进行转录、转译和性状表达，这种现象称为流产转导。 特点：形成微小菌落是流产转导子的特点。 发生流产转导的细胞在分裂后，只能将外源DNA分配给一个子细胞，而另一子细胞可获得供体基因经转录、转译形成的少量产物——酶，因此在表型上仍可出现轻微的供体菌特征，每经过一次分裂，就受到一次“稀释”。所以，能在选择性培养基平板上形成微小菌落就成了流产转导子的特点。 特点：？小菌落。 2、局限转导（Restricted transduction）p220 局限转导是1954年在E.coli K12菌株中发现。是指通过部分缺陷的温和噬菌体把供体菌的少数特定基因携带到受体菌中，并获得表达的转导现象。（如E.coli K12菌株, λ噬菌体、）。 （1）特点： ①只能转导供体菌的个别特定基因（一般为噬菌体整合位点两侧的基因）； ②该特定基因由部分缺陷的噬菌体携带； ③缺陷噬菌体是由于它在脱离染色体的过程中发生的低频率（10－5左右）“误切”，或由于双重溶源菌的裂解而形成，在后一情况下可形成50％缺陷噬菌体。 ④可诱导：通过UV等因素对溶源性菌株诱导裂解而产生局限转导噬菌体。 (2)类型： 局限转导根据转导频率的高低可将其分成两类： ①低频转导（LFT，low frequency transduction） 低频转导—单溶源菌 高频转导--双重溶源菌 温和噬菌体感染供体菌后，可使供体细胞溶源化，当该供体菌发生诱导裂解时，由于极少数（10-5）的前噬菌体发生不正常切离，其结果会将插入位点两侧之一的少数宿主基因（如E.coli λ前噬菌体的两侧分别为gal基因和bio基因）连接到噬菌体DNA上，通过衣壳的“误包”，就形成了缺陷噬菌体（Defective phage）。当这种缺陷噬菌体再次感染宿主细胞时，可整合到宿主的核基因组上，使宿主细胞成为一个局限转导子（即获得了供体菌的gal或bio基因），而不是一个溶源菌，因而对λ噬菌体不具有免疫性。 LFT裂解物：含有极少数局限转导噬菌体的裂解物。 低频转导(LFT)： 用低感染复数的LFT裂解物感染宿主，获得极少量局限转导子的方式。 宿主染色体被不正常切离的频率极低，故只能获得极少量部分缺陷噬菌体，即极少量局限转导子。 感染复数：感染时病毒与细胞数量的比值 multiplicity of infection: ‘m.o.i’ ②高频转导（HFT，high frequency transduction） 双重溶源菌：当E.coli gal-(不发酵半乳糖的营养缺陷型)用高m.o.i的LFT裂解物进行感染时，则凡感染有λdgal噬菌