诊断临床病原体检查诊断临床原体检查病原体检查.pptVIP

感染性疾病实验诊断程序 正确、规范采集和运送标本 通过直接显微镜查见病原体，或检出病原体抗原成分，或通过分子生物学方法检测到病原体核酸，结合病人病史、症状、体征，可作出初步诊断 同时，进一步对病原体进行分离和鉴定，确定感染病原体的类型 对细菌和真菌感染要进行抗生素敏感试验 标本的采集、运送和检查方法 一．标本的采集和运送 所有采集标本均置于无菌或清洁容器中，不能接触消毒剂和抗菌药物。 血液：一般在发热初期和高峰期采集，如已用抗生素，则在下次用药之前采集。成人采血量为每次10-20毫升，儿童和婴儿为1.5-5毫升。专用血培养瓶。 血标本采集次数 根据研究，仅采血一次分离率约占80%，培养2次分离率约占90%，而培养三次的分离率约占99%。 多瓶接种 ①厌氧菌菌血症占菌血症5-15%, ②有10%菌血症不是单一微生物引起, ③长期使用抗生素患者可呈现L型菌. ④免疫低下患者易发生真菌感染；根据情况做二种血培养瓶的培养,需氧和厌氧或需氧和L型培养。 标本采集操作 应注意严格无菌操作，避免污染杂菌。 标本送检 接种血液样本的培养瓶应立即送检，如因某种原因不能立即送检时，勿放冰箱存放。 尿液 常用清洁中段尿。对于厌氧菌采用膀胱穿刺法收集、无菌厌氧小瓶运送。 粪便 取脓、血、粘液送检，排便困难及婴幼儿可用直肠拭子采集，根据检验目的选用不同的运送培养基及分离培养基提高检出率。 呼吸道标本 鼻咽拭子、痰、纤支镜采集物，经气管采集分泌物可避免正常菌群污染，是确定下呼吸道感染的理想标本。 脑脊液及其它体液 对于脑脊液常见病原菌如脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌，抵抗力弱，采集后应立即接种。对于胸、腹水和心包积液由于含菌量少宜接种量大或按血培养处理。 眼、耳标本 用无菌拭子采样，可用角膜刮屑。 泌尿生殖道标本 可用尿道口分泌物、外阴糜烂面分泌物、宫颈口分泌物和前列腺液等。 创伤、组织和脓肿标本 首先清创，用无菌拭子取材。 二.检查方法 １.显微镜检查 悬滴法用于病原体的动力观察，暗视野或相差显微镜用于病原体的生长、形态、运动方式。 染色检查：革兰氏染色用于细菌和真菌的检查；抗酸染色用于结核菌及放线菌的检查；墨汁染色用于新型隐球菌的检查。 2.病原体特异性抗原检测 主要用于不易培养的微生物的快速诊断，用已知抗体，利用免疫荧光、酶联免疫技术等检测标本中的抗原。 3.病原体核酸的检测 主要是PCR和DNA探针杂交检测标本中的病原体。 4.病原体分离培养和鉴定 细菌培养，将标本接种相应的培养基上，根据菌落形态、生化反应鉴定细菌；不易培养的微生物进行细胞培养。 5.血清学检测 检测病原体刺激机体产生的抗体，IgM型抗体检出为新近感染指标。 细菌耐药性检查 抗菌药物的作用机制 干扰细菌细胞壁的合成，使细菌不能生长繁殖。 影响细菌细胞蛋白质的合成，使细菌丧失生长繁殖的物质基础。 破坏核酸的代谢，阻碍遗传信息的复制。 抗生素的广泛使用所造成的抗生素的选择性压力使医院感染控制面临严峻挑战，因此对细菌耐药性的发生机制和耐药监测便成为临床微生物检测中的一项重要工作。 细菌的耐药性及其发生机制 1.遗传学机制 染色体介导的耐药　为细菌本身所固有的耐药，一般具有种属特异性,如肠球菌耐头孢菌素，一些革兰阴性杆菌耐万古霉素等。 质粒介导的耐药　耐药基因易于传播,目前该类耐药在临床上占有重要地位。如由质粒介导的产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。 2.生物化学机制 产生灭活酶或钝化酶　这些酶可使抗生素失活。如产生β-内酰胺酶、氨基糖苷类钝化酶、氯霉素乙酰基转移酶等。 作用靶位的改变　作用靶位改变后使抗生素失去作用位点。如甲氧西林耐药的葡萄球菌可以产生一种新的青霉素结合蛋白，使细菌与β-内酰胺类抗生素的亲和力降低而导致耐药。 主动外排机制　如铜绿假单胞菌对多种常用的抗生素耐药,主要是由于其外膜存在着独特的药物泵出系统。 药物敏感试验 1.纸片扩散法（K-B法） 菌液浓度：0.5麦氏浊度（1.5×108CFU/mL） 琼脂平板厚度：4mm（9cm，25ml；15cm，60ml) 抗生素纸片：9cm，6-7张（4张左右）；15cm，12张 培养温度、时间：35℃，18-20小时 判断标准：NCCLS当年版 “敏感”即表示测试菌可被测定药物常规剂量给药后在体内达到的血药浓度所抑制； “耐药”即表示测试菌不能被在体内感染部位可能达到的抗菌药物浓度所抑制，临床治疗无效。 “中介”者提示该细菌对常规用量体液或组织中的药物浓度的反应性低，使用高于正常给药量有疗效。 2.液体稀释法 耐药菌监测试验 1.耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)检测 包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCoN)。 不能使