毛细管电泳—紫外检测法测定幻灯片.pptVIP

毛细管电泳—紫外检测法测定益母草中的活性成分 第一章 绪论 本章节主要分三个部分进行阐述： 一是中草药有效成分分析方法的发展； 二是毛细管电泳在黄酮类化合物分析中的应用； 三是本实验的研究任务 1.1中草药有效成分分析方法的发展 中药有效成分研究的发展是随着中药事业的不断发展,随着相关学科的不断发展而经历一个由简单到复杂,由主观到客观,由浅显到深入、全面综合的过程。 表1.1 1998年和2000年药物分析杂志发表定量测定论文统计表 高效毛细管电泳法 高效毛细管电泳法(HPCE)是粒子以电场为驱动力,在毛细管中按其淌度(单位电场下离子的平均电泳速度) 或分配系数不同进行高效、快速分离的一种电泳新技术 。 表1.2 CE分离模式的分离依据及应用范围 1.2 毛细管电泳在黄酮类化合物分析中的应用 黄酮类化合物 不同的黄酮类化合物具有不同的生物活性。 主要的生理活性有:抗菌作用、抑制癌细胞的生长或抗癌作用、解痉挛作用、降低血压作用、女性激素样作用、抑制胆碱酯酶作用、扩张冠状动脉的作用等。 此外, 还有大量研究表明黄酮类化合物有降血脂、止血、镇咳祛痰、降低血管脆性、抑制血小板聚集等多种药理作用。 毛细管电泳法分离黄酮类化合物的进展 在黄酮类化合物的分析中,常用的是CZE 和MECC ,CITP很少用。 MECC 法 朱加虹利用胶束电动毛细管色谱法分离银杏叶提取物中的黄酮类化合物芦丁和槲皮素,研究了有关的测定条件。 Shufang Wang等用熔融石英毛细管(70.0 cm ×7μm I.D) ,0.2molH3PO4 ,0.2 mol SDS ,乙腈,2-丙醇为缓冲溶液,检测波长254 nm ,用MECC 测定EP-imedium brevicornum Maxim中的黄酮类物。 邓永智等利用胶束毛细管色谱法将中药银杏浸膏中槲皮素、山萘素、异鼠李素3 种黄酮分离,以SDS 作表面活性剂, 25mol/ L 硼砂/ 25mol/ L 磷酸二氢钾/ 1 %(V/ V) 甲醇作运行液。 CZE 法 Mcghiie用25 mmol/L 硼酸盐, 20% 甲醇分析了甘蔗中的10 个黄酮类化合物。 Ulrike用200mmol/L 硼酸盐缓冲液分析了接骨木花及其制剂中的黄酮类化合物。 Tao Bo等用熔融石英毛细管(58.5cm ×50 μm I. D. ) ,缓冲溶液为硼酸盐(pH = 10.5) ,运行电压30 kV ,检测波长210 nm ,分离分析甘草根中的黄酮类化合物。 Aramendia 等和Shihabi 等以CZE 模式分离了5 种异黄酮. CITP 法 Seitz 等用PTFE 管, 前导电解质为15mmol/L HCl-30%甲醇-0.2%HPMC, 尾随电解质为10 mmol/L甘氨酸-30%甲醇-0.2%HPMC, 电导法检测, 分析了洋接骨木Sambususnigra 中的木犀草素、山柰酚、异槲皮素、金丝桃甙和芦丁等黄酮类成分。 1.3 本实验的研究工作 鉴于黄酮类化合物在药用方面的重要性，本实验就选取中草药中益母草为研究对象，采用毛细管电泳技术，运用紫外检测手段对其中所含的黄酮类化合物予以检测分析。 表1.3 四种黄酮类化合物 第二章 实验部分 仪器 溶液的制备 实验方法 仪器 高效毛细管电泳—紫外检测装置（P/ACETM MDQ 毛细管电泳系统 ）(Beckman,USA)配备有紫外检测器； Lambda800型紫外—可见分光光度计（美国，PE公司）； PHS-3C 型精密酸度计(上海大普仪器有限公司) ； KQ-100 型超声波清洗器(无锡电子设备厂)； Milli-Q超纯水系统（Millipore, Bedford，France）； 未涂层弹性石英毛细管柱(58cm ×75μm ,有效长度48.8cm) 溶液的制备 标准储备液的配制：山奈酚、芦丁、槲皮素、金丝桃甙各取1.00mg溶于无水乙醇中，配成1.00mg/ml的标准储备液，置于冰箱中保存。 样品溶液的配制：准确称取0.2g益母草对照品，分四次加25ml无水乙醇浸提，每次超声波浴30 min，合并提取液，离心后取上清液，浓缩定容至10ml容量瓶。样品分析时用电泳运行液稀释后进行测定。 实验方法 未使用过的毛细管先用1mol/L的NaOH溶液活化30min，再用Milli-Q超纯水冲洗30min，抽干待用。 每天开机后用0.1mol/L硝酸，二次水，0.1mol/LNaOH，二次水各清洗3min。在样品分析运行前，用分离缓冲液冲洗3分钟，以获得良好的分离检测重现性。所有的溶液均用聚乙烯滤膜（0.45μm