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PCR测定临床应用及结果临床意义
* * PCR测定临床应用及结果临床意义 北京大学人民医院 张正 100044 概述 临床PCR检测三条件 ? SDA批准使用的试剂盒 ?国家批准符合要求的实验室 ?经行政部门同意并培训后持证上岗 关于结核杆菌等5项检测的 具体应用 ? 结核分枝杆菌(TB) 靶序列来源: a. 单抗检出的TB抗原旦白编码基因 b. TB特异性核酸片段克隆 c. 插入序列 实验设计特点 举例 65KD,165bp;MPB64,240BP;IS6110,123bp;IS986,245bp; 16sDNA,584bp. 注意事项 ? 标本处理 ：痰液化，抑制物去除 ? 试剂质控及灵敏度 临床评价 ?结核的PCR临床主要应用 a.结核与其他分枝杆菌区分 b.结核耐药基因 c.对含菌量低的标本的分离 d.为临床可疑者捕捉信息 ? PCR方法与痰涂片及TB培养的比较 应做比对研究 临床评价 沙眼衣原体(Ct) 实验设计特点 靶及引物选择 ?外膜蛋白基因(MOMP-OMPI) ? 7.5kb质粒 隐蔽性基因质粒拷贝 ? 16srRNA基因 注意事项 标本取材是关键 临床评价 ?细胞培养 McCoy. Hela-229金标准 ? ELA法 ? PCR法.专家希望此法为新金标 HBV-DNA . 实验设计特点 ? S及C混合引物 ? 定量用治疗监测 104 , 106 临床评价 一 般临床靠免疫标志 但无法明确时可测 拉米呋定及干扰素治疗监测 新问题研究 HCV-RNA 实验室设计特点 ? 需扩增二次 ? 低温启动UDG系统--RNA不稳定性 注意事项 防止RNase污染 杜绝溶血 临床评估 ? 定性用于诊断(只有抗HCV无法 决定病毒存在状况） ? 定量用于治疗监测 HLA 方法:免疫学 分子生物学 ： PCR SSCP RFLP 基因芯片 I 类(A,B,C) 与疾病发生频率有关 II 类(DR,DQ,DP) 等 移植配型
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