HPLC法同时测定川芎药材中阿魏酸、咖啡酸的含量.docVIP

HPLC法同时测定川芎药材中阿魏酸、咖啡酸的含量 　　川芎(Rhizoma Chuanxiong)为伞形科植物川 芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)的 干 燥 根茎，其所含主要有效成分有酚酸类、内酯类、生物碱和挥发油等，广泛应用于临床治疗。目前，对川芎中成分的含量测定多集中在阿魏酸、藁本内酯和川芎嗪等的测定。本研究将川芎药材中阿魏酸和咖啡酸两组分含量同时测定，并对不同产地的药材进行含量比较，以完善川芎的质量控制。 　　1 试剂与方法 　　1.1 仪器 　　Agilent-1100 型高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器(DAD)、四元梯度泵、在线真空脱气机和柱温箱。超声波清洗器(DS3120 DC)，RE-52 型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。 　　1.2 试剂 　　甲醇为色谱级，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。 　　1.3 试验用药 　　阿魏酸、咖啡酸对照品(自制，经 HPLC 检测质量分数均gt; 99.0%)。川芎购自四川等 10 产地，经鉴定均为正品。 　　1.4 方法 　　1.4.1 溶液制备 　　1.4.1.1 对照品储备液的制备 分别取阿魏酸和咖啡酸对照品适量，用甲醇溶解，制成浓度分别为0.5008mg/mL 和 1.000mg/mL 的对照品溶液。 　　1.4.1.2 供试品溶液的制备 选取不同产地的川芎药材，粉碎过筛后，分别精密称定粉末约 1.0g，置锥形瓶中，然后加入 0.5mol/L NaOH 溶液 50mL，超声提取 20min，共提取 3 次，冷却，静置，离心，取上清液，用稀 HCl 调 pH=2，然后用乙酸乙酯等量萃取3 次，合并萃取液，使用旋转蒸发仪蒸干，用甲醇复溶并稀释至 25mL 量瓶中，0.45mu;m 微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。 　　1.4.2 色谱条件 色谱柱：Kromasil-ODS(250mmtimes;4.6mm，5mu;m);流动相：甲醇 -0.5% 醋酸水(35：65);检测波长：320nm;流速：1.0mL/min;进样量：10mu;L;柱温：30℃。 　　2 结果 　　2.1 系统适用性试验 　　按照上述样品处理方法和色谱条件进行测定，两峰之间的分离度大于 1.5;理论塔板数大于30 000;拖尾因子在 0.95 ～ 1.05 之间，均满足定量要求。 　　2.2 线性关系的考察 　　分别精密量取阿魏酸和咖啡酸对照品溶液适量，配成混合对照品系列溶液，按照上述色谱条件，进样分析，以各自的浓度 X(mu;g/mL)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，得到阿魏酸和咖啡酸回归方程分别为：Y=5.339times;104X+230.8，r=0.9996;Y=4.588times;104X+470.2，r=0.9995。线性范围分别为：13.62~57.40mu;g/mL 和 29.40~515.7mu;g/mL。 　　2.3 精密度试验 　　取阿魏酸和咖啡酸的中浓度混合对照品溶液，按照 1.4.2 色谱条件，连续进样 6 次。分别测得阿魏酸和咖啡酸的峰面积，计算两组分峰面积的 RSD分别为 0.3% 和 0.5%，精密度良好。 　　2.4 重复性试验 　　取 6 份同一产地川芎药材粉末，精密称定，按照 1.4.1 项下处理，按 1.4.2 色谱条件，进样分析。阿魏酸和咖啡酸含量的 RSD 分别为 0.2% 和0.2%。 　　3 讨论 　　3.1 提取条件的优化 　　本实验通过考察不同酚酸类成分的提取方法，比较了甲醇、甲醇 - 水、甲醇 -5% 甲酸水、0.5mol/L NaOH 溶液这 4 种不同的提取溶剂，氯仿、乙酸乙酯等 2 种不同的萃取溶液，对样品进行提取分析后进样分析，通过考察阿魏酸和咖啡酸的含量，从而选择了最佳R的提取条件。 　　3.2 色谱条件的优化 　　本实验考察了 3 根不同的色谱柱，分别为Waters-C18(150mmtimes;3.9mm，4mu;m);Venusil XBP C18(L)(250mmtimes;4.6 mm，5mu;m) 和 Kromasil -ODS(250mmtimes;4.6mm，5mu;m)，综合考虑选择 Kromasil 色谱柱。参考药典选择检测波长为 320nm，此波长可避免杂质干扰且可较好的检测该两组分。 　　川芎道地药材的形成模式为道地产区独特的生态环境与先进的栽培种植技术相结合的双因素关联决定型，川芎有效成分之间、土壤营养值之间均存在一定的相关关系，不同