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HPLC法测定左卡尼汀注射液的含量及有关物质的研究 　　左卡尼汀是一种氨基酸衍生物，又称左旋肉碱，是哺乳动物能量代谢必需的体内天然物质，其作用主要为促进脂质代谢。左卡尼汀注射液在临床上应用广泛，效果良好，是治疗心力衰竭的首选药物，主要用于慢性肾衰竭及血液透析者肉碱缺乏性疾病，目前己被美国药典和我国国家药品标准目录收载。但我国现有制剂标准中，并未设定其有关物质的检查项。目前的研究中，也多以左卡尼汀及杂质A为主，未见其他杂质的相关报道。我国的新药研究领域，有关物质逐步引起人们的重视，为提高用药安全性，在研发过程中通常需对原料和制剂中的有关物质进行详细的研究。欧洲药典和英国药典收载的左卡尼汀原料药质量标准中，列出了其中常见的4种杂质，即杂质A,杂质B、杂质C和杂质D，但仅对杂质A的量进行了限定(不超过0.5%)。两部药典中所用色谱柱为丙胺基甲基硅烷基键合硅胶柱，柱子填料和规格在国内并不常见。经本课题组验证，使用该两部药典中的色谱条件无法使主峰与杂质A峰完全分离，且无法有效区分杂质B,C和D。故本研究建立一种可同时用于左卡尼汀含量和各有关物质的测定方法，使左卡尼汀主峰、杂质A、杂质B、杂质C和杂质D5个色谱峰均能完全分开，以提高药品的质量标准和安全性，为该品种的研发及质量标准的建立和提高提供保证。 　　1仪器与试药 　　岛津分析型高效液相色谱仪(二极管阵列检测器、二元高压梯度泵、真空脱气机、柱温箱、自动进样器;色谱工作站);超声波清洗器(南京垒君达超声电子设备有限公司);METTLER实验室pH计(梅特勒-托利多仪器有限公司);METTLER XS105型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。 　　对照品左卡尼汀(批号L0399900)、杂质A(批号L0399905)、杂质B(批号1418-064A1)、杂质C(批号1394 - 016A2)购于欧洲药品质量管理局，杂质D(批号MS200705-OS A)购于深圳德博瑞生物科技有限公司，纯度均大于98%;左卡尼汀原料药(批号0171302002)，购于东北制药集团股份有限公司;左卡尼汀注射液(3批中试放大注射液由悦康药业集团有限公司生产，其他由北京中医药大学中药现代研究中心研制)。乙腈为色谱级，水为超纯水，其他为分析纯。 　　2方法与结果 　　2. 1溶液的配制 　　2.1.1供试品溶液I 精密吸取左卡尼汀注射液0. 5 mL于50 mL量瓶中，用流动相稀释并定容至刻度，摇匀，即得。 　　2.1.2供试品溶液II 精密吸取左卡尼汀注射液0. 5 mL于10 mL量瓶中，用流动相稀释并定容至刻度，摇匀，即得。 　　2.1.3对照品储备液分别称取左卡尼汀、杂质A、杂质B、杂质C和杂质D的对照品适量，精密称定，加流动相制成质量浓度分别为2. 62 , 87. 40 ,56. 00 , 44. 80和50. 80 mu;g/mL的溶液，摇匀，即得。 　　2.1.4对照溶液精密吸取供试品溶液II 10 mu;L于10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。 　　2. 2色谱条件 　　采用Alltech Brava Amino色谱柱(250 mm x4. 6 mm, 5mu;m )，流动相为0. 01 mol/ L磷酸盐缓冲液-乙腈(25 : 75 )，流速1. 0 mL/min，柱温为40 ℃，检测波长205 nm，进样量10 mu;L 。 　　2. 3系统适用性试验 　　按上述色谱条件，左卡尼汀峰与杂质峰分离度大于1. 5，理论塔板数按左卡尼汀计大于3 000。 　　2. 4专属性考察 　　分别精密称取5份左卡尼汀原料药适量，置于25 mL量瓶中。取2份分别加入1.0 mol/L盐酸和1. 0 mol/ L氢氧化钠溶液各5 mL，室温放置1h后中和并加流动相至刻度;取1份加入30%过氧化氢溶液8滴，室温放置1 h后加流动相至刻度;最后2份分别加入1.0 mol / L盐酸和1.0 mol/L氢氧化钠溶液各5 mL，放置于烘箱(57 ℃)0.5 h后中和，加流动相至刻度。上述5份处理过的样品摇匀静置，滤过，取续滤液进样测定。左卡尼汀原料药在碱加热破坏情况下可产生杂质A，在其他条件下并无明显杂质出现。各杂质峰与左卡尼汀峰分离良好，表明该色谱条件适用于有关物质的测定。 　　2. 5检测限和定量限 　　将”2. 1. 3”项下对照品储备液用流动相逐步稀释成不同浓度，注入液相色谱仪，分别以信噪比3: 1和10: 1为标准测定各成分的检测限和定量限。 　　2. 6线性关系考察 　　分别精密吸取左卡尼汀及各杂质的对照品储备液，加流动相制成