第六节脂质体制备技术.pptVIP

２．脂质体荷电性 　含酸性脂质如磷脂酸(PA)和磷脂酰丝氨酸(PS)等的脂质体荷负电，含碱基(胺基)脂质例如十八胺等的脂质体荷正电，不含离子的脂质体显电中性。 　脂质体表面电性与其包封率、稳定性、靶器官分布及对靶细胞作用有关。 　测定方法： 　　　荧光法 　　　显微电泳法 3．脂质体粒径和粒度分布测量 　显微镜法 　电子显微镜法 　Coulter计数法 　激光散射法 　离心沉降法 　微孔滤膜—吸光度法 * ?四、脂质体的制法 ? ??1、薄膜分散法 ??将磷脂、胆固醇等类脂质及脂溶性药物溶于氯仿(或其他有机溶剂中)然后将氯仿溶液在茄形瓶中旋转蒸发，在瓶内壁上形成一层薄膜；将水溶性药物溶于磷酸盐缓冲液中，加入烧瓶中不断搅拌，即得脂质体。 * ?2、注入法 ?将磷脂与胆固醇等类脂质及脂溶性药物溶于有机溶剂中(一般多采用乙醚)，然后将此药液经注射器缓缓注入加热至50℃(并用磁力搅拌)的磷酸盐缓冲液(或含有水溶性药物)中，加完后，不断搅拌至乙醚除尽为止，即制得大多孔脂质体，其粒径较大，不适宜静脉注射。再将脂质体混悬液通过高压乳匀机二次，则所得成品大多为单室脂质体，少数为多室脂质体，粒径绝大多数在1μm以下。 * ?3、超声波分散法 ?将水溶性药物溶于磷酸盐缓中，加入磷脂，胆固醇与脂溶性药物共溶于有机溶剂的溶液，搅拌蒸发除去有机溶剂，残液以超声波处理，然后分离出脂质体再混悬于磷酸盐缓冲液中，制成脂质体的混悬型注射剂。经超声波处理大多为单室脂质体，所以多室脂质体经超声波进一步处理亦能够得到相当均匀的单室脂质体。 * ?4、冷冻干燥法 ?脂质体亦可用冷冻干燥法制备，对遇热不稳定的药物尤为适宜。先按上述方法制成脂质体悬液后分装于小瓶中，冷冻干燥制成冻干燥制剂，惟全部操作应在无条件菌条件下进行。 ?5、其它方法，如逆相蒸发法、复乳法、熔融法、表面活性剂处理法、离心法、前体脂质体法和钙融合法等。 * ?(六)脂质体的作用特点 ?脂质体在体内细胞水平上的作用机制有吸附、脂交换、内吞(endocytosis)、融合(fusion)等。 * 体内作用途径 ?1、膜间转运与接触释放 * ?2、 吸附与融合 * ?3、内吞 * ?脂质体广泛用作抗癌药物载体，具有以下作用特点： ?1、淋巴系统定向性 ?抗癌药物包封于脂质体中，能使药物选择性地杀伤癌细胞或抑制癌细胞的繁殖，增加药物对淋巴的定向性，使抗癌药物对正常细胞和组织无损害或抑制作用，改变药物在组织中分布。因此，用脂质体为载体的抗癌药物新剂型能使药物的疗效提高，减少剂量，降低毒性，减轻变态和免疫反应。 * ?如甲氨蝶呤的脂质体给小鼠静脉注射后， 被巨噬细胞吞噬速度快，不像游离药物3小时内即被肾排泄；6小时后在肝、脾、肾、肠、肺等组织中的浓度比游药物高20倍。 　Juliano 等对放线菌素D、长春花碱、柔红霉素、阿糖胞苷脂质体的体内分布进行了研究，发现制成脂质体后组织内分布大大改变，在组织中包封的药物量大大增加。 * ??如阿糖胞苷脂质体注射16小时后，包封药物在肝中的浓度比游离药物大68倍，包封的阿糖胞苷在3－16小时内消除很少，尤其在肝中； ??放线菌素D脂质体注射3小时后，各种组织中包封的药物为游离的2-20倍； * ??丝裂霉素C包封于脂质体中，静脉给药后，此超微粒载体能透入癌细胞内，然后逐渐释放药物，引起癌细胞裂解与死亡。 ??有关抗癌药物采用脂质体为载体的报导很多，其它尚有氟脲嘧啶、博莱霉素、门冬酰酶、8-氮杂鸟嘌呤、6-巯嘌呤等。这些化疗药物包封于脂质体中，给带瘤小鼠腹腔注射后，存活率和存活时间都有不同程度的增加。 * ?2、脂质体中药物释放过程 ?包在脂质体内药物释放，有的是通过内吞作用被体内网状内皮系统的吞噬细胞作为外来异物所吞噬。有的是融合作用(Fusion)，即脂质体的膜材与细胞膜构成物相似而融全进入细胞内。 * ?凡带电荷和液体中性的脂质体主要通过细胞内吞作用进入溶酶体，然后裂解释放出药物。由于溶酶体的通透性有限，故分子的药物就不能释放到细胞的其它部位，而融合作用往往不受这种限制，因此脂质体的释放药物是具有选择性的。 ? * ?3、使抗癌药物在靶区具有滞留性 ?由于肿瘤细胞中含有比正常细胞较高浓度的磷酸酶及酰酶、因此将抗癌药物包制成脂质体，不仅由于酶使药物容易释出，且可促使药物中肿瘤细胞部位特异地蓄积。因此，如将包封于脂质体的抗癌药物直接注入瘤体，能使局部有效的药物浓度维持较长的时间，利于杀癌细胞。 * ?4、脂质体在体内的生物运转 ?静脉注射甲氨喋呤脂质体制剂，考察它的血药浓度及各脏器的分布。结果显示与静注单纯的甲氨喋呤喋比较，脂质体