专题3植物的组织培养技术课题1菊花的组织培养【要点导学】要点一.docVIP

专题3 植物的组织培养技术 课题1 菊花的组织培养 【要点导学】 要点一：植物组织培养的基础知识 （一）植物组织培养的基本过程 1、愈伤组织：离体的植物组织或细胞，培养一段时间后，会通过细胞有丝分裂，形成愈伤组织。愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。 脱分化（去分化）：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化，或者叫做去分化。 再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。 外植体:用于离体培养的植物器官或组织片段材料因素的影响 不同的植物组织，培养的难易程度差别很大，容易进行无性繁殖的植物也容易进行组织培养。同一种植物材料，材料的年龄、保存时间的长短也有影响。幼龄、保存时间短的植物材料容易培养成功菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧芽。 营养因素的影响 常用的一种培养基是 MS培养基，其主要成分：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐有机物蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求激素的影响植物激素的浓度、使用的先后顺序以及用量的比例等，都会影响实验结果。 ①按照不同的顺序使用这两类激素，会得到不同的实验结果。 使用顺序 实验结果 先使用生长素，后使用细胞分裂素 有利于细胞分裂，但细胞不分化 先使用细胞分裂素，后使用生长素 细胞既分裂又分化 同时使用 分化率提高 ②当同时使用这两类激素时，两者用量的比例影响植物细胞的发育方向。 比值 植物细胞的发育方向 比值高 有利于根的分化、抑制芽的形成 比值低 有利于芽的分化、抑制根的形成 比值适中 促进愈伤组织的生长 ? ? ? ? pH、温度、光照等条件的影响 不同植物对各种条件要求往往不同。进行菊花组织培养，一般将pH控制在5.8左右，温度控制在18～22℃，并且每日用日光灯照射12h。 制备MS固体培养基①配置各种母液 将各种成分按比例配制成～浓缩液，使用时，根据浓缩液比例计算用量，加水稀释。②配置培养基pH后分装。在菊花组织培养中，可以不添加植物激素，原因是菊花茎段组织培养比较容易。 ③灭菌和其他器械要一起高压蒸汽灭菌外植体消毒 3、接种接种前用体积分数为70%的酒精将工作台擦拭一遍体积分数为70%的酒精将装有培养基的锥形瓶整齐地排列在酒精灯左侧。将消过毒的菊花茎段在无菌培养皿中切成小段（长约0.5～1cm）。左手持锥形瓶，右手拉开捆扎锥形瓶的绳子，并将封口膜攥于右手手心，以避免封口膜接触瓶口的一面被污染。左手持瓶，使瓶口旋转通过火焰；右手用镊子夹取菊花茎段，插入培养基中。培养在无菌箱中培养，温度控制在18～22℃，每日用日光灯光照12h移栽打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间培养几日。然后用清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中。栽培将幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗生长情况，适时浇水、施肥，直至开花1、无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键 无菌技术包括培养基消毒灭菌和植物材料（外植体）的消毒灭菌。对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药剂的消毒效果；另一方面还要考虑植物材料的耐受能力。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。 有毒药品的用后处理：外植体灭菌用过的有毒药品要妥善处理（如氯化汞等），以免引起环境污染。 2、设置对照实验和重复组 通过设置重复组和对照组可以选出最佳的实验材料、最好的培养基配方、找出实验失败的原因。如设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作是否合格，有没有被杂菌污染。 不同组的同学设置不同的激素浓度，相互比较植物生长的速度。 结果分析与评价对接种操作中污染情况的分析：接种3～4 d后，在接种操作中被杂菌污染的培养物会表现出被污染的现象。一般情况下，细菌污染可能是由接种人员造成的，如未戴口罩，接种时说话，或手及器械消毒不严等。真菌污染可能是植物材料灭菌不当。 定期观察生长状态并记录，如果出现问题，及时分析处理。? ⑴选材是否恰当无菌技术是否过关接种是否成功：如果接种的外植体长出愈伤组织或释放出胚状体，组织培养的第一步就成功了。要适时转换培养基，以便愈伤组织或胚状体进一步分化成再生植株。 B.将制备好的外植体接种到培养基中时，点燃酒精灯 C.锥形瓶的封口膜取下后为避免被酒精灯灼烧，应放在工作台上 D.所有的接种操作都必须在酒精灯旁进行 答案：D 解析：在植物组织培养过程中要严格无菌操作，所以为避免细菌感染，所以的接种操作都必须在酒精灯旁进行。 【例