蛋鸡非典型性新城疫的诊治.doc

蛋鸡非典型性新城疫的诊治 王建东 （江苏省常熟市虞山动物防疫站，常熟 215500） 2009年10月常熟市某蛋鸡场10 000羽正处于产蛋高峰期的蛋鸡发生一种以采食减少，腹泻，产蛋急剧下降为主要症状的疾病。现将实验室诊断情况报告如下： 1 发病情况 江苏省常熟市某蛋鸡场从2009年3月从无锡马山鸡场购进10 000羽伊莎蛋鸡苗。免疫程序为：7日龄用“新城疫-传染性支气管炎H120二联活疫苗”2羽份/羽点眼，25日龄用“新城疫-传染性支气管炎H52二联活疫苗”2羽份/羽饮水免疫，60日龄用新城疫I系苗肌肉注射，110日龄用新城疫-减蛋下降综合征二联灭活疫苗肌肉注射。2009年10月10日起这批处于产蛋高峰期的鸡陆续发病，产蛋量急剧下降。 2 临床症状 部分鸡只表现为零星掉头，采食时做“甩头”动作，鸣叫声减弱，后来有喘鸣声，精神沉郁，呆立不动，鸡冠颜色由鲜红色逐渐变成浅红甚至苍白色，产畸形蛋，沙壳蛋，破碎蛋增多，蛋形变小，死亡数由开始每天10多羽逐渐发展到每天30多羽，产蛋量由每天520公斤降到 400 公斤。 3 剖解病理变化 剖解病死和临死鸡20羽，病理变化表现为：肝脾肾不同程度肿大，心包积液，心冠脂肪有点状出血，心肌色淡，嗉囊食少充满酸臭液体，腺胃乳头水肿，泄殖腔粘膜轻微出血，胸腔积液，腹水增多。 4 实验室诊断 4.1 病料采集与处理 无菌采集剖检鸡脑、肝、脾、肺等组织，放于灭菌平皿中剪碎，用含抗生素的PBS（含2 000U/ml青霉素、2mg/ml链霉素、50μg/ml庆大霉素和1 000U/ml制霉菌素，用10mol/L NaOH，调pH值至7.0～7.4）按1∶5比例对组织样品进行匀浆，转移至灭菌指形管中，5 000rpm离心10 min，将上清转入新的灭菌指形管中准备进行病毒分离接种[9]。 4.2 病毒分离 取上述处理后的上清液以尿囊腔途径接种5只10日龄SPF鸡胚，接种量为0.2ml/胚，置孵化器中37℃继续培养，在接种后的18～24 h左右开始照胚，若鸡胚在24 h内死亡则弃去不用，以后每隔12 h照胚1次，死亡鸡胚置4℃冰箱冷藏4～6 h以收缩血管，无菌收集鸡胚尿囊液。接种的5只鸡胚中，有3只于接种后48 h死亡，2只于接种后60 h死亡。在收获尿囊液的过程中观察发现所有接种胚均表现为胚胎全身出血，尤以头部、足趾和翅出血明显，符合NDV接种鸡胚后产生的典型病变特征。 4.3 病毒的鉴定 按文献[9]介绍的方法通过血凝和血凝抑制试验进行分离病毒鉴定。 4.3.1 血凝试验（HA） 在 96 孔“V”型微量反应板中，每孔加入25μL生理盐水；每排第1孔加入25μL 鸡胚尿囊液，依次作倍比稀释至第 11 孔，弃去。每排各孔加入 25μL 生理盐水；每排各孔加入 25μL 浓度为1%鸡红细胞；将微量反应板在振荡器上稍微振荡，充分混匀，室温或 4℃静置，从底部观察。在第12孔（对照孔）的红细胞完全沉积呈现“红太阳”状时进行结果判定，将反应板倾斜，观察每排沉积的红细胞与对照孔呈相同的流淌现象，则说明没有凝集，若没有此现象则说明红细胞凝集，以完全凝集的最高稀释倍数为血凝效价，用此尿囊原液制作四单位抗原，用 HA试验进行检测并调整。HA实验结果显示5只接种胚收获的尿囊液血凝价分别为25、25、26、25、25。 4.3.2 血凝抑制试验（HI） 在96孔“V”型微量反应板中，每孔加入25 μL生理盐水；每排第一孔分别加入 25 μL 新城疫或H5亚型禽流感标准诊断血清，依次作倍比稀释至第 10 孔，弃去；在每反应孔中加入25 μL的四单位抗原，将微量反应板在振荡器上充分混匀，室温静置 30～40min；每孔加入 25 μL 1%鸡红细胞，在振荡器上充分混匀后，室温或 4℃静置，在第 12 孔（对照孔）的红细胞完全沉积呈现“红太阳”状时进行结果判定，此时第11 孔（阴性对照孔）红细胞则完全凝集，没有此现象。将反应板倾斜，完全抑制四单位抗原的凝集红细胞的作用则表现为红细胞沉积于孔底，和生理盐水对照孔26（第 12 孔）流淌现象相同。分别用新城疫阳性血清和H5、H9亚型禽流感阳性血清进行的血凝试验结果显示，收获尿囊液的血凝作用可以被新城疫阳性血清所抑制，而不能被H5、H9亚型禽流感阳性血清抑制，因此可以判定分离到的病毒为NDV。 根据临床症状，流行特点，剖解病理变化及实验室检测结果将该鸡群所发疾病诊断为非典型性新城疫。 5 防制措施 疫情确诊后，我们调整饲料配方，多添加电解多维，对发病鸡舍加强消毒，多通风换气，淘汰病鸡，并做好无害化处理。对尚未发病的鸡应用2羽份/羽新城疫IV系弱毒活疫苗进行紧急免疫接种，饮水中加入氟苯尼考，强力霉素防止继发感染。10天后，鸡群不再有死亡现象发生，产蛋率逐渐上