槐花米中芦丁的提取分离与鉴定.docVIP

槐花米中芦丁的提取与鉴定 背景知识 芦丁（Rutin）又称芸香苷，广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica L 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高(含量可达12-16%)，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水形成的苷。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有3分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10 000；沸水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液，酸化后又可析出，因此，本实验采用碱提取酸沉淀法提取芦丁。 芦丁具有维生素P样作用。能维持血管的正常通透性，减低血管的脆性，缩短流血时间，可作为高血压病的辅助治疗剂。亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。 一、实验目的 通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作；熟悉芦丁、槲皮素的结构性质和检识方法。 二、实验要求 独立完成实验，从槐花米中提取出芦丁并进行鉴定。 三、实验原理 芦丁属黄酮类化合物，分子中有较多酚羟基，具弱酸性，易溶于热碱中，酸化后又析出，因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁，又利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差较大的特性进行重结晶精制。 四、实验材料和器皿 【器皿】 烧杯（500ml）2个，试管2个，布氏漏斗1个，玻璃棒1根，抽滤瓶1个，滴管，移液管（10ml）1根，洗耳球1个，滤纸，pH试纸，电热炉，真空抽滤机。 【材料】 槐米花30 g，饱和石灰水，0.4%硼砂水溶液，镁粉，pH试纸，浓盐酸，95%乙醇，10% α萘酚乙醇溶液，浓硫酸，蒸馏水。 五、实验内容 操作步骤： ?? 称取30g槐花米于研钵中研成粉状物，置于500mL烧杯中，加入饱和石灰水，加热至沸，并不断搅拌，煮沸30分钟后，趁热抽滤。然后用浓盐酸调节pH值为4~5。放置1-2h，使沉淀完全，抽滤，沉淀用水洗涤2~3次，得到芦丁的粗产物。 流程图： 芦丁的提取与分离流程图 操作步骤： ?? 称取30g槐花米于研钵中研成粉状物，置于500mL烧杯中，加入300ml热水，以饱和石灰水调pH至8-9，加热至沸，并不断搅拌，煮沸10-20分钟后，趁热抽滤。然后用浓盐酸调节pH值为4~5。放置1-2h，使沉淀完全，抽滤，沉淀用水洗涤2~3次，得到芦丁的粗产物。 六、实验关键及注意事项 1、本实验采用碱溶酸沉法从槐花米中提取芸香苷，收率稳定，且操作简便。在提取时应注意将槐花米捣碎，使芸香苷易于在热水中溶出。槐花米中含有大量粘液质，加入石灰乳使生成钙盐沉淀除去。pH应严格控制在8-9，不得超过10.因为在强碱条件下煮沸，时间稍长可促使芸香苷水解而破坏，使得收率下降。酸沉淀时pH应为4-5，不宜过低，否则会使芸香苷形成烊盐溶于水，也降低收率。 2、提取过程中加入硼砂水的作用：既能调节碱性水溶液的pH值，又能保护芸香苷分子中的邻二酚羟基不被氧化，亦保护不与钙离子络合，使芸香苷不受损失。 七、芦丁的鉴定 芦丁的定性反应 取芦丁3-4mg，加乙醇5-6ml使其溶解，分成二份作下述试验： A. 盐酸-镁粉反应：取上述溶液1-2ml，加2滴浓盐酸，再加少许镁粉，注意观察颜色变化情况。（红色） B. Molish反应：取上述溶液1-2ml，然后再加入等体积的10% α-萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两液面产生的颜色变化（紫红色）。 八、思考题 1、在一开始用酸调节pH值时，如果加入的盐酸过量，pH值小于4-5，请问对实验会产生什么后果？为什么？ 2、根据这个实验，请总结出用酸碱调节法提取中药活性成分的适用条件及一般原理。 1 沉淀（粗制芦丁） 在60—70℃下用浓盐酸调pH4—5，静置2小时，抽滤。沉淀用水洗至中性，自然干燥，称重。 滤液 残渣 置于500 ml烧杯中，加300ml热水，在搅拌下加饱和石灰水调pH至8-9，加热煮沸10-20min，趁热过滤。 槐花米30g（研碎） 精制 悬浮于蒸馏水中（约500ml），加热煮沸10-20ml，至澄清，趁热过滤。 滤液 不溶物（弃去） 沉淀（精制芦丁） 静置充分冷却，抽滤，沉淀用蒸馏水洗至中性，自然干燥，称重 选做内容