植物胚芽组织培养稀释法制备蔬菜空白.docVIP

题目：植物胚芽组织培养稀释法制备蔬菜空白实验设计 署名：彭威 问题的提出 如何得到可供IMS相关实验的洁净蔬菜？ 参考文献：瓜果蔬菜农药残留现状 /view/ff7d8ac39ec3d5bbfd0a7478.html 实验假设与理论依据 实验假设： 假设市面上购买的任意蔬菜种子里面可能含有农残，种植出的蔬菜同样含有农残,进而无法保证蔬菜空白的洁净程度。 理论依据： 详见《瓜果蔬菜农药残留现状》。说明蔬菜种子普遍含有农残。 植物组织培养是指在无菌条件下，对离体植物组织（器官或细胞）分离并在培养基中培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成一完整的植株的一门实验技术。组织培养的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每个细胞携带着一套完整的基因组，因此具有发育成完整植株的潜在能力。植物组织当中原本已经分化的细胞，一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出全能性，从已经分化定型的细胞，脱分化，成为恢复分裂能力的细胞，并能重新生长发育成完整的植株。 胚芽组织的全能性优于普通植物组织，所以选择植物胚芽组织培养稀释法制备空白（待植物生根后截取胚芽再培养连续三次）。计算如下：种子发芽约体积增大10倍，原有农残稀释10倍。截取1/10再次培养。累计三次10次共稀释1000倍。 实验目标 得到可信的空白蔬菜叶。 实验对象、方法及手段 实验对象 豌豆苗（其它：油麦菜、菠菜、茼蒿、大白菜、上海青） 实验方法 胚芽 组织培养稀释法制备蔬菜空白。 实验内容 黄沙的清洗。 实验室催芽。 植物营养琼脂培养基的配制。 豌豆苗在100级超净环境下胚芽的截取和再截取。 培养箱温湿度，光照强度控制。 耗材 器设备： 高压蒸汽灭菌锅、洁净工作台、循环水式真空泵、电子天平、酸度测定仪、光照培养箱 器具： 搪瓷杯、搪瓷盘、100ml三角烧瓶（12个/组）、250ml三角瓶（2个/组）、试剂瓶、解剖刀柄与刀片、单面刀片、剪刀、长镊子、培养皿、移液管、漏斗、量筒、烧杯（50、100、500、1000m1），酒精灯、火柴、玻璃棒、洗尔球、封口薄膜、牛皮纸、线绳、牛皮筋、脱脂棉、滤纸、pH试纸（5.4-7.0）、标签纸、称量纸、药勺等。 实验材料：豌豆苗（其它：胡萝卜贮藏根、水稻幼胚） 试剂： MS培养基配方: 成分 分子量 使用浓度(mg/L) 硝酸钾　KNO3 101.11 1900 硝酸铵　NH4NO3 80.04 1650 大量元素 磷酸二氢钾 　KH2PO4 136.09 170 硫酸镁　MgSO4.7H2O 246.47 370 氯化钙　CaCl2.2H2O 147.02 440 碘化钾　KI 166.01 0.83 硼酸　H3BO3 61.83 6.2 硫酸锰　MnSO4.4H2O 223.01 22.3 微量元素 硫酸锌　ZnSO4.7 H2O 287.54 8.6 钼酸钠　Na2MoO4.2 H2O 241.95 0.25 硫酸铜　CuSO4.5 H2O 249.68 0.025 氯化钴　CoCl2.62 237.93 0.025 铁盐 乙二胺四乙酸二钠　Na2.EDTA 372.25 37.3 硫酸亚铁　FeSO24.7H2O 278.03 27.8 肌醇 100 甘氨酸 2 有机成分 盐酸硫胺素　VB1 0.1 盐酸吡哆醇　VB6 0.5 烟酸　VB5或VPP 0.5 蔗糖　sucrose