病原实验三.pptVIP

医学免疫学基本技术 内容 安排 报告要求 1、【实验名称】 2、【目的要求及意义】 3、【实验原理】 4、【仪器器材】略 5、【实验步骤】流程图，简写 6、【实验结果】填于报告册上 7、【分析】结果分析 8、【讨论】心得体会 无菌抽血 淋巴细胞分离 荧光抗体检测 对流免疫电泳 对流免疫电泳图示（教材P146） 玻片凝集试验 玻片凝集试验图示 玻片凝集试验阴性与阳性结果对照 示教：试管凝集（P142） * * * * * * 实验二 淋巴细胞分离 对流免疫电泳 玻片凝集试验 荧光抗体检测 1.2 1.3 2 3 无菌抽血 1.1 荧光抗体检测 淋巴细胞分离 玻片凝集试验 对流免疫电泳 无菌抽血2ml （30min） （90min） （50min） （120min） （20min） 1、准备及检查操作器具。 2、正确坐姿，选定部位，固定手肘部。 4、由内而外碘酒消毒（不走回头路径）。 5、由内而外酒精脱碘（不走回头路径）。 3、绑好止血带（打活结）。 6、正确进针，抽血2ml。 7、松开止血带活结。 8、迅速抽出注射器同时用干棉签压好进针孔，屈肘。 6、离心（1500rpm，5min），反复洗涤3次。 1、取2ml人静脉血注入肝素抗凝瓶中，摇匀。 2、取抗凝血2ml加Hank’s液2ml对倍稀释，混匀。 3、将稀释血液4ml缓缓加入到2ml淋巴细胞分层液上。 4、配平，高速离心（2000rpm，20min）。 5、吸出单个核细胞层至另管，加适量Hank’s液，混匀。 7、倒掉全部液体，加Hank’s液0.2ml，吹打成悬液。 结果：得到淋巴细胞悬液0.2ml (Ficoll液等) 2、丙酮固定3min。 3、微量移液器加抗DNA荧光抗体20 μm覆盖于细胞涂膜上，恒温培养箱内 37℃保湿30min。 5、干燥后用甘油加盖玻片封片。 4、PBS平皿内振荡洗涤3min，重复1次。 6、荧光显微镜镜检。 1、淋巴细胞涂片，干燥。 原理：可溶性抗原+相应抗体=沉淀物 过程：制板、打孔、加样、电泳、观察 实质：沉淀反应 阴 极 阳 极 Ag Ag Ab Ab 阴极标记 抗体（Ab）=AFP诊断血清 生理盐水 AFP阳性血清 抗体 抗体 抗体 抗体 待检一血清 待检二血清 原理：颗粒性抗原+相应抗体=凝集物 过程：分格、标记、 实质：凝集反应 加液、加菌、 静置、观察。 沙门 志贺 待检菌 待检菌 待检菌 沙门氏菌 诊断血清 生理盐水 阴性对照 志贺氏菌 诊断血清 阴性 （－） 阳性 （＋） ＋＋凝集反应的最高稀释比例 为该被检血清的凝集效价