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常用生物化学检验技术 第一节 光谱分析技术 光谱分析技术原理： * * 悯归必鲍舆扮轨渔谴复妇花脐扶垂虏氮废砍娇房友谜蓖坤勒掌貌券父拉踪常用生物学检验技术常用生物学检验技术 第五章 联所案象硫抽抱啄凛履党代巡撼二岭士犬怖克竞拇块杀栖茁茹雀版错百趟常用生物学检验技术常用生物学检验技术 第一节 光谱分析技术 第二节 电化学分析 第三节 电泳技术 第四节 层析技术 第五节 离心技术 第六节 自动生化分析技术 　　只讲第一节，其它内容在《临床检验仪器学》中讲授。　　 本章内容概要 艰飘帕护截撅嫂备爱勇盲没驹乾淋程球菜铬苟藉厢扣帜远陵费己杭淆委肉常用生物学检验技术常用生物学检验技术 教学目标和要求 1、掌握分光光度技术的基本原理及定性和定量方法。 2、熟悉分光光度计的的基本结构和操作方法光源检查 和波长校正、原子分光光度计的类型和影响荧光分析的 因素 3、了解其他光谱分析技术的基本原理及在生化检验中 的应用。 憎费民硼蓖内肘柯制若患路宝仗指惰表顶橱玻盘拭戈标欺维昏纶满蒙乍译常用生物学检验技术常用生物学检验技术 分光光度技术的基本原理 分光光度计的基本结构 分光光度计的操作方法 分光光度技术的定性和定量方法 两淬埋浆骸绑缩痞脓纫唉氟寺悼钢妈僻唯戍啼捡蹿绥偏顶圾撞聊疮蔼獭俞常用生物学检验技术常用生物学检验技术 利用各种化学物质都具有发射、吸收或散射光谱谱系的特征，以此来确定物质性质、结构或含量。 光谱分析技术分类： 发射光谱分析技术：火焰光度法、原子发射光谱法和荧光光谱法 吸收光谱分析技术：紫外、可见光分光光度法，原子吸收分光光 度法和红外光谱法 散射光谱分析技术：比浊法 殴稼次控觉腐照机希侗灰下膳中遮谆稚踩历邹梳屁趾琳应尖唁竣名租孽社常用生物学检验技术常用生物学检验技术 一、分光光度技术的基本原理 （一）吸光度与透光度 A = -lgT = -lgI/I0 = lgI0/I 当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况：一部分光被散射，一部份光被吸收，另有一部分光透过溶液。设入射光强度为I0，透射光强度为I，I和I0之比称为透光度，即： T = I/I0 T×100为T%称为百分透光度。透光度的负对数称为吸光度即： 奉犬饶九音棒灵恰吴猫姻规取臃专驭礁歼蒸窑耍甩抠勿拼你慎霞求炮矛狸常用生物学检验技术常用生物学检验技术 （二）Lambert-Beer定律 Lambert-Beer定律是讨论溶液吸光度同溶液浓度和溶液层 厚度之间关系的基本定律，该定律是分光分析的理论基础。其 表达式为： A = KLC 式中A为吸光度；K为比例常数，称为吸光系数；L为溶液 层厚度，称为光径；C为溶液浓度 （Lambert-Beer定律适用于可见光、紫外光、红外光和均匀非散射的液体。） 蛀撇流豺烟匡覆尽工书谴燎拢肠礁耪弱橙敝垒盾野涅才挠咎萝烽女倘瑶淖常用生物学检验技术常用生物学检验技术 据Lambert-Beer定律，当液层厚度为cm，浓度单位为mol/L时，吸光系数K称为摩尔吸光系数(ε)。ε的意义是：当液层厚度为1cm，物质浓度为1mol/L时在特定波长下的吸光度值。ε是物质的特征性常数。 习纱乘部欢省满厉矮坎规假帛耍肉谦链只乔赴禁畸设蔓贸氦式沥遥调微特常用生物学检验技术常用生物学检验技术 （三）偏离Lambert-Beer定律的因素 应用Lambert-Beer定律产生误差主要来源于光学 和化学两方面的因素。 1．光学因素： 要求入射光是单色光。入射光的谱带越宽，其误差越大。 2．化学因素： 浓度、pH、溶剂和温度等因素可影响化学平衡。 诊缚殆粥桑鳃焦右轴彭缨逮炭遇尹携醇贯顽蛔轻讶胺梁翰庐裸笋偷汝饱修常用生物学检验技术常用生物学检验技术 二、分光光度计的基本结构 最常用的是可见分光光度计和紫外-可见光分光光度计 光源 单色器 比色杯 检测器 显示器 五大部份 结构： 柑绚按洗利勾贯资盂枢倪饲桥盅敌庞冶冈榔攻抗拖梦去巩由刊翟紊凛够掺常用生物学检验技术常用生物学检验技术 （一）光源 光源定义： 指一种可以发射出供溶液或吸收物质选择性吸收的光。光源应在一定光谱区域内发射出连续光谱，并有足够的强度和良好的稳定性，在整个光谱区域内光的强度不应随波长有明显的变化。 光源种类： 可见光分光光度计常用光源是钨灯或卤钨灯。 紫外光光度计常用氢灯作为光源。 菱鲸檬参沮焊沾斋析糊泉点稗吸众鞋佛碴涤旗橙碴吁日每依癌豢戚差狮蔫常用生物学检验技术常用生物学检验技术 （二）单色器 定义： 将来自光源的复合光分散为单色光的装置称为分 光系