(本科及硕士生化实验考核试卷总.docVIP

分光光度法 利用物质对某种波长的光具有选择性吸收的特性建立起来的鉴别物质或测量其含量的技术 标准曲线 通过测定一系列已知组分的标准物质的某种理化性质，通过作图，得到的数值曲线 百分吸光系数 一定波长下，当C以g/100ml表示时，溶液浓度为1g/100ml且光程为1cm时所测的吸光度 摩尔消光系数 一定波长下，当C以mol/L表示时，溶液浓度为1mol/L 且光程为1cm时所测的吸光度 空白管 用与样品相同的一切试剂但不含待测物质制成的用以消除被比色容器，溶剂以及其他试剂吸收单色光所造成的误差的对照组 双缩脲反应 双缩脲在碱性溶液中与CuSO4反应生成紫红色化合物 比活性 单位重量的蛋白质样品中所含的酶活性单位 酶活性单位 37C保温15分钟产生1ug酚为一个酶单位 米氏常数（Km） 酶的特征性常数，可近视的表示酶对底物的亲和力，为反应速率等于1/2Vmax时的底物浓度 迁移率 带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度 电泳 带电颗粒在电场的作用下向着与其电性相反的电极方向移动 电渗 在电场作用下,液体相对于固相支持物会发生相对位 移的现象 凝胶层析 混合物随流动相流经固定相的凝胶层析柱时，混合物中各物质因分子量大小不同而被分离 层析 利用各组分物理性质的不同，将多组分混合物进行分离及测定的方法 分配系数(Kd) 衡量溶质分子被阻滞程度的特征性常数。Kd=（Ve—Vo）/Vo 聚丙烯酰胺凝胶浓度（T％） 交联剂克数占单体与交联剂总克数的百分数 聚丙烯酰胺凝胶交联度（C％） 100ml凝胶溶液中单体与交联剂的总克数 内水体积（Vi）层析柱中溶胀凝胶颗粒内部所含水相的总体积 外水体积（Vo）层析柱中溶胀凝胶颗粒间隙中液体所占体积 即 空隙的总体积 洗脱体积（Ve）被分离物质通过层析柱完全被洗脱出来所需要的洗脱液的体积 分子筛 凝胶颗粒是一类具有三维空间多孔性网络结构的物质，不带电荷，起到滤过或“筛”的作用 等电点 蛋白质溶液处于某一PH时，蛋白质解离成正负离子的趋势相等，成为兼性离子，此时溶液的PH值为该蛋白质的等电点 印迹术 将各种生物大分子从凝胶转移到一种固定基质上的过程 血糖 血中葡萄糖浓度 3.89~6.11mmol/L 限制性内切酶 可以识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶 感受态细胞 受体细胞经过特殊处理，细胞膜通透性发生改变，成为能允许载有外源性DNA的载体分子通过的感受态细胞 重组子 含有重组DNA分子的转化细胞 转化 受体菌直接摄取供体菌游离的DNA获得新的遗传性状的过程 转染 转导 以噬菌体为媒介，将供体菌DNA片段转移到受体菌内，使受体菌获得新的遗传性状 逆转录 以RNA为模板，由逆转录酶催化四种脱氧核糖核苷酸聚合产生DNA的过程 PCR 在模版DNA，引物和四种脱氧核糖核苷酸存在的条件下，依赖DNA聚合酶的酶促合成反应 碱裂解法 NaOH可溶解细胞，变性DNA与RNA，基于该特性提取质粒DNA的方法 质粒DNA 独立于宿主细胞染色体外，能自我复制，稳定遗传的双链环状DNA 琼脂糖凝胶电泳 支持物为琼脂或琼脂糖的电泳技术，线性DNA在电场中的迁移率与相对分子质量成正比，相对分子质量越大，受到摩擦力越大，迁移速度越慢。 1、简述在DNA和RNA分离与鉴定实验中，0.14mol／L NaCl、柠檬酸钠、5%SDS、氯仿、异戊醇、95%冷乙醇的主要作用。（5分） 0.14mol／L NaCl：利用溶解度差异分离核糖核蛋白、脱氧核糖核蛋白（核糖核蛋白在0.14mol／L NaCl中溶解度高、脱氧核糖核蛋白溶解度低） 柠檬酸钠：抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的水解 5%SDS：使脱氧核糖核蛋白解聚，DNA和核蛋白分离 氯仿：利用溶解度差异分离DNA和蛋白质（蛋白质在其中沉淀，DNA则溶于水相） 异戊醇：减少泡沫产生，有助于于分相 95%冷乙醇：将DNA析出 2、采用两种方法对待测γ-球蛋白溶液进行蛋白质定量分析。 BCA法：标准管为50?l牛血清白蛋白（1.8mg/ml）＋50?l水＋2ml BCA工作液，A=0.250 测定管为100?lγ-球蛋白溶液＋2ml BCA工作液，A＝0.300 紫外分光光度法：标准管为2ml牛血清白蛋白（1.8mg/ml）＋2ml生理盐水，A＝0.300 测定管为2mlγ-球蛋白溶液＋2ml生理盐水，A＝0.450 分别计算两种方法测得的γ-球蛋白溶液的浓度。（3分） C1s=1.8mg/ml A1s=0.250 V1s=50?l C1x= ？ A1x=0.300 V1x=100?l 带入公式，自己注意哪个对应哪个？？ 这两种蛋白质定量