26例骨髓增生性肿瘤JAK2基因直接测序分析.docVIP

26例骨髓增生性肿瘤JAK2基因直接测序分析 　　【摘要】目的 了解JAK2基因V617F突变在骨髓增生性肿瘤中的发生率。方法 收集骨髓增生性肿瘤共26例。其中PV组8例；ET组12例；CML组4例；PMF组2例。直接测序检测JAK2基因V617F突变。结果 PV组JAK2V617F阳性率为87.5%（7/8）；ET组阳性率为33.3%（4/12）；PMF组阳性率为50%（1/2）；AML、ALL、CML、CNL、CEL等恶性血液病患者及正常对照均为阴性。结论 检测JAK2基因V617F突变可作为一种分子标记对PV进行诊断，并对ET、PMF诊断提供帮助。 　　[Abstract] Objective To learn the incidence of JAK2 gene V617F mutation in the myeloproliferative disease （MPNs）. Methods Collected MPNs 26 cases with PV 8 cases， ET 12 cases and PMF 2 cases， then tested JAK2 gene V617F by sequences. Results The positive rate of JAK2 gene V617F mutation was 87.5% （7/8） in PV and 33.3%（4/12） in ET and 50%（1/2） in PMF. However all the cases in AML、ALL、CML、CNL、CEL were negative. Conclusion JAK2 V617F mutation test might serve as a gene marker for diagnosis in PV， at the same time help to the diagnosis for ET and PMF. 　　【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2015）03-0001-02 　　骨髓增殖性肿瘤（MPNs）是一类起源于多能造血干细胞，以一系或者多系分化相对较成熟的骨髓细胞克隆性增生异常为特点的一组疾病的统称。增生的细胞其细胞形态和功能相对正常，常表现为多能髓样造血干细胞所属的细胞系（包括红细胞系、血小板系、粒-单核细胞系）中的一系或多系细胞恶性增生。骨髓增生性肿瘤（MPNs）包括真性红细胞增多症（PV）、原发性血小板增多症（ET）、慢性髓细胞样白血病（CML）和原发性骨髓纤维化（IMF）。研究发现，JAK2 V617F突变发生在PV、ET、特发性骨髓纤维化、骨髓发育不良症候群、嗜酸细胞过多综合征、慢性骨髓单核细胞性白血病、慢性中性粒细胞性白血病、系统性肥大细胞增多症等疾病中。正是由于JAK2基因V617F突变在多种疾病中都有发现，检测人群该基因突变将会对进一步阐明其引发的广谱的血液病提供依据。 　　对于JAK2基因V617F突变进行分子诊断国内外的专家建立了数种方法，包括：直接测序、特异引物等位基因PCR法、酶切法、荧光PCR法等，本文用测序法对MPNs做了检测。 　　1.材料与方法 　　1.1试剂与仪器：Universal Genomic DNA Extraction Kit Ver.3.0试剂盒购自大连宝生物公司， dNTP，Tag酶购自南京凯基，生物工程技术有限公司，荧光定量PCR仪为罗氏480，凝胶成像分析系统为美国UVP公司Imaging System。 　　1.2标本来源：收集重庆市儿童医院骨髓增生性肿瘤共26例。其中PV组8例；ET组12例；CML组4例；PMF组2例。 　　1.3 标本采集：采集静脉全血，EDTA-Na2抗凝，4℃保存备用。 　　1.4 DNA提取：采用大连宝生物Universal Genomic DNA Extraction Kit Ver.3.0试剂盒提取DNA，操作按说明书进行，抽提好的DNA样品经紫外分光光度计检测1.62D260/ OD2801.85 　　1.5 引物设计及合成 　　1.5.1 根据Genbank提供的参考序列（Accession number：9944145），利用Primer5.0与Bioedit7.0自行设计引物探针 　　1.5.2 引物序列 　　上游引物：5’- AGCATTTGGTTTTAAATTATGGAGTATATT-3’ 　　下游引物5’-CTGAATAGTCCTACAGTGTTTTCAGTTTCA-3’ 　　1.6 扩增体系及条件 　　反应体系为50ul，包括10×PCR缓冲液10ul；10umol/L dNTP 1ul；5U/ul Ta