淮海工學院生物化学大实验报告niujun.docVIP

海 洋 学 院 综合大实验报告 专 业： 生物技术 班 级 生技121班 姓 名： newjhon 学 号：2 1 题 目： 生物化学大实验 指导教师： 孙玉英 2014-2015 学 年 第1学期 2014年12月22日 -- 2015 年 1月 2 日 酶的特异性及温度、pH对酶活性的影响 班级：生技121 姓名：牛军 学号：20121211111 【摘要】 本实验采用控制变量法分别研究唾液淀粉酶的特异性以及温度、pH对该酶活性的影响，得出结论：唾液淀粉酶对淀粉有水解作用；在37℃和pH 6.8时，酶的作用效果分别是最好的。 【关键词】唾液淀粉酶，温度，pH，特异性 1前言 唾液淀粉酶是由唾液腺分泌的一种水解酶，可溶性淀粉、直链淀粉、糖原等α-1,4-葡聚糖，水解α-1,4-糖苷键的酶碘化钾溶于蒸馏水中，待全部溶解后再加，振荡溶解。 2.2实验方法 2.2.1酶的特异性 （1）取两支试管编号①、②，①号加入0.5%的淀粉液2mL,②号加入0.5%的蔗糖液2mL； （2）与两支试管各加入制备好的唾液1mL； （3）将两支试管同时放入37℃恒温水浴锅中保温； （4）15分钟后，取出两试管，各加入Benedict试剂1mL； （5）将两试管同时放入沸水中煮沸6分钟； （6）取两支试管，观察记录颜色的变化，并注意是否有红棕色产生。 表1 酶的特异性验证 试剂 管号 ① ② 0.5%的淀粉液（mL） 2 — 0.5%的蔗糖液（mL） — 2 制备好的唾液（mL） 1 1 37℃恒温水浴保温15min Benedict试剂（mL） 1 1 沸水浴6分钟→观察记录颜色的变化 2.2.2温度对酶活性的影响 ①取三支试管并编号①、②、③，同时加入5mL0.5%淀粉液及1mL唾液混匀； ②将管 ①、管 ②、管 ③ 同时分别放入冰浴、37℃水浴、沸水浴中； ③15分钟后，取出各管，分别加入碘液数滴，观察并记录各管颜色变化。 表2 温度对酶活性的影响 试剂 管号 0.5%淀粉液（mL） 5 5 5 唾液（mL） 1 1 1 水浴（15min） 冰浴 37℃ 沸水浴 碘液 数滴 数滴 数滴 2.2.3 pH对酶活性的影响 ①取试管3支编号6、7、8，按下表加入试剂； ②3支试管同时放入37℃恒温水浴锅内保温； ③15分钟后，取出3支试管，分别加入碘试剂数滴，每加一滴，注意摇匀，观察并记录颜色变化。 表3 pH对酶活性的影响 试剂 管号 ③ 0.5%淀粉液（mL） 2 2 2 pH1.5溶液（mL） 1 — — pH6.8溶液（mL） — 1 — pH9.8溶液（mL） — — 1 唾液（mL） 1 1 1 37℃恒温水浴保温15min 碘液 数滴 数滴 数滴 3结果与分析 3．1实验结果 3.1.1酶的特异性 实验现象：① 号试管经沸水浴后，试管内颜色仍为蓝色，但在试管底部可以看出有些许砖红色沉淀出现；②号试管经沸水浴后颜色没有发生变化(仍为浅 蓝色。（如图1） 图1 酶的特异性 实验现象表明：唾液淀粉酶能水解淀粉，而不能水解蔗糖。说明唾液淀粉酶具有特异性。 3.1.2温度对酶活性的影响 实验现象：①号试管加5滴碘液并混匀后颜色趋近与碘液原来的颜色，但较②号试管颜色较深；②号试管加5滴碘液并混匀后也趋近碘液本身颜色，但比碘液颜色浅；③号试管加5滴碘液并混匀后变成深蓝紫色。（如图2）。 图2 温度对酶活性的影响 实验现象表明：经过冰水浴后，唾液淀粉酶活性降低，但仍能将淀粉分解成葡萄糖；而在37℃条件下唾液淀粉酶活性较高，将淀粉分解成葡萄糖。说明低温对唾液淀粉酶活性有一定影响。经过沸水浴后，唾液淀粉酶变性，不能分解淀粉。 3.1.3 pH对酶活性的影响 实验现象：①号试管逐滴加入3滴碘液并混匀后变成酒红色；②号试管逐滴加入3滴碘液并混匀后接近碘液本身的颜色；③号试管逐滴加入3滴碘液并混匀后变成浅蓝黄色。（如图3）。 图3 pH对酶活性的影响 实验现象表明： pH为1.5（强酸性）条件下，唾液淀粉酶可以水解淀粉；pH为6.8（接近中性）条件下，唾液淀粉酶活性较高，能水解淀粉；pH为9.8（碱性）条件下，唾液淀粉酶仍能水解淀粉，只是较pH 1.5和pH 9.8 相比，酶的活性较弱。 3.2结果分析 本实验研究酶的特异性及温度、pH对酶活性的影响得到以下结果：唾液淀粉酶只能水解淀粉而不能水解蔗糖，验证了酶的特异性，与理论相符