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Tittle： 2012荷兰格罗宁根大学食物检测 Text：by groningen university team Background：每年全世界将近13亿吨食物被扔掉，大部分是由于超过不准确的保质期，一个可靠的检测食物是否腐烂的系统能够节约金钱和减少食物浪费。 Brief introduction：食物检测是一个用来检测食物破坏的系统，它使用枯草芽孢杆菌，它们对于腐肉气体的基因反应已经被鉴定，连接到一个色素产生系统。这样消费者就可以通过肉眼判断肉是否已经腐烂！ Operating principle：腐肉挥发物能够激活PsobA启动子，进而触发色素产生（蓝色或黄色） Construction：所使用的结构是简单且高效的，在腐肉激活启动子的调控下将会色素产生。当枯草芽孢杆菌感应到腐肉挥发物的存在时，腐肉激活启动子将会被激活，将允许下游基因的表达。我们将色素基因插入其下游，使其由启动子控制，所以基因将表达当启动子活跃的时候。我们使用枯草芽孢杆菌的主要质粒（Bba-k818000）包含sacA、氯霉素抗性基因（用来检验染色体整合和筛选）且这个backbone有E-coli的复制原点，所以它能够应用与大肠杆菌。 紧接着，我们又加入另外的一个检测线路，使用PwapA启动子，当存在腐肉挥发物时，该启动子被关闭，当肉是新鲜的时，该启动子活跃。 ①腐肉挥发物到达枯草芽孢杆菌 ②PsboA启动子激活BBa-k818100 ③色素产生 新原件： 1.BBa-k818000：结合链：与枯草芽孢杆菌的染色体结合于SacA位点且在大肠杆菌中复制，由psac-cm导出。 2.BBa-k818600：腐肉传感系统：包含原始枯草芽孢杆菌启动子PsobA（BBa-k818100）和amilGFP黄色蛋白携带rbs（BBa-B0034），PsobA可以由腐肉挥发物强烈的激活当枯草芽孢杆菌呈指数增长时，可以在6个小时后，产生明显的黄色。 先前原件： BBa-K592010，2.BBa-K592009；3.BBa-K823023； BBa-K818100；BBa-K818400 Pathway：经过社会调查，明确了研究方向，收索资料，查阅文献，确定研究材料，通过建模，优化结构，进行市场调查和实际实践，优化检测元件，使其能够推广且安全。 Biobrick： submitted biobrick BBa-k818000：这个原件是设计来满足我们项目中工作枯草芽孢杆菌的backbone的，这个质粒由Psca-Cm通过插入一个生物砖酶切微点，一个终止子（BBa-B0015）在suffices序列的后面和红色荧光蛋白的序列（RFP）在其多重克隆微点（MCS）。具有多寄主复制原点，可在大肠杆菌中复制。质粒跟sacA结合。质粒设计成结合一个克隆的插入到枯草芽孢杆菌via染色体，构建质粒和sacA之间的双重组。这使得在枯草芽孢杆菌的双向问题易于检测，正确插入插入物的将无法代谢蔗糖。 另外一个优点是，它能复制跟枯草芽孢杆菌的染色体紧密结合的质粒，这样一旦插入并表达成功，将不需要再次进行抗性筛选，这使得克隆更容易且稳定。 终止子插入到红色荧光蛋白序列的后缀之后，这使得克隆更快更容易，新的生物砖可以插入到这一端基因线路，通过更换rfp生物砖，E-coli 转化体将不会产生红色。（因其rfp基因被取代） 质粒被导入到任何具有氯霉素抗性的枯草芽孢杆菌168寄主中，质粒能在经过氯霉素或氨苄青霉素筛选的大肠杆菌中被放大。使用红白显示，红色荧光蛋白不能由枯草芽孢杆菌产生。 BBa-K818100HeBBa-K818200 SboA和Fnr 是两个枯草芽孢杆菌的启动子，是对于腐肉挥发物最为敏感的两个。 BBa-K818400，BBa-K818500和BBa-K818600 大多数表达基因的编码器，在sboA启动子的控制下，当sobA启动子被激活则下游的表达基因将被表达，产生对应产物。 BBa-K818210和BBa-K818310 红色荧光蛋白基因的编码器，由fnr启动子控制，还有AmliGFP，由alsT启动子管理，当启动子被激活时，下游的表达基因将表达出对应产物。 Application：通过检测食物腐烂程度，减少食物浪费和资源浪费，给消费者一个准确的食物保质期，亦可保护消费者的身体健康。 Summarize：腐肉检测系统本身是一个传感器或者说是感应器，我们以根据其思路，制作出自己的传感器。例如金属探测细菌来寻找矿物或者地雷。 当然我最感兴趣的是“kill switch”，不管任何工程细菌，检测细菌等到他们工作完成时，我们应将其杀死，并要将其对环境的影响降低到最低，死亡开关则是一个相对较好的方法。要解决的