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鸡卵类粘蛋白的制备及活力测定课件
鸡卵类粘蛋白的制备及活力测定 一、实验目的 掌握从鸡蛋清中提取卵类粘蛋白的方法 了解凝胶层析法的工作原理，掌握其基本操作技术 掌握离子交换纤维素柱层析的基本操作技术 掌握测定鸡卵类粘蛋白活力的方法 二、实验原理 （一）鸡卵类粘蛋白的特性 1.糖蛋白 2.在中性及偏酸性溶液中对热及高浓度的脲、有机溶剂都有较高耐受性；碱性溶液不稳定 3.在50%丙酮或10%三氯乙酸溶液中仍有较好的溶解度 （三）离子交换层析的基本原理 （四）活力测定原理 鸡卵类粘蛋白具有强烈的抑制胰蛋白酶的作用；胰蛋白酶能水解酯键、酰胺键和肽键，利用这一性质用人工合成的底物或天然的蛋白质可以测定胰蛋白酶的活力，由此可计算卵类粘蛋白的活力。 三、实验流程 卵类粘蛋白的抽提（活力测定）→分子筛层析（凝胶预处理→装柱→平衡→上样→洗脱→收集蛋白峰→活力测定）→离子交换层析（活力测定）→透析→丙酮沉淀→离心(活力测定) 四、操作方法 参见实验讲义 五、思考题 1.利用凝胶层析法分离混合样品时，怎样才能得到较好的分离效果？ 2.通过本实验，指出酶活力测定对于酶的分离提纯有何意义？ * * （二）凝胶过滤（分子筛层析）的基本原理 *
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