果胶含量的测定方法二.doc

果胶的测定（方案一）： 黄晓钰，刘邻渭等．食品化学综合实验[M]．中国农业大学出版社. 2002．158~159 实验原理：果胶经水解，其产物——半乳糖醛酸可在强酸环境中与咔唑试剂产生缩合反应，生成紫红色化合物，其呈色深浅与半乳糖醛酸含量成正比，由此可进行比色定量测定果胶。 实验试剂：1.化学纯无水乙醇或95%乙醇。 2.精制乙醇：取无水乙醇或95%乙醇1000ml，加入锌粉4g，硫酸（1:1）4ml，至于衡温水浴中回流10h，用全玻璃仪器蒸馏，馏出液每1000ml加锌粉和氢氧化钾各4g，并进行蒸馏。 3. 0.15%咔唑乙醇溶液：称取咔唑0.150 g，溶于精制乙醇并定容至100ml。 4.半乳糖醛酸标准溶液：先用水配置成浓度1 g/L的溶液，再配制成浓度分别为（0、10mg/L、20 mg/L、30 mg/L、40 mg/L、50 mg/L、60 mg/L、70mg/L）的系列半乳糖醛酸标准溶液。 5.优级纯浓硫酸。 操作方法：1样品处理： 总果胶提取：（鲜样）研磨新鲜样品50g，放入1000ml烧杯中，加入0.05mol/L HCl 400mL，放置沸水浴中加热1h，加热时应随时补充蒸发损失的水分。冷却后，移入500ml容量瓶，定容摇匀，过滤，滤液待用。（干样）磨细的干燥样品5g，置于250ml三角烧瓶，加入0.05mol/L HCL 150ml，装上冷凝器，与沸水浴中加热回流1h，取出冷却甚至室温，用水定容至200ml，摇匀，过滤，滤液待用。 水溶性果胶提取：新鲜样品应尽量研磨碎，干燥的样品应磨细后过60目筛。样品中存在有果胶酶时，为了顿化酶的活性，可以加入适量热的95%乙醇，是样品溶液的乙醇最终浓度约为70%，然后于沸水浴中沸腾回流15min，使果胶酶钝化，冷却过滤后，以95%乙醇洗涤多次，再用乙醚洗涤，以除去全部糖类、脂类及色素，最后风干除去乙醚。 2果胶提取：水溶性果胶的提取：将样品研碎，新鲜样品标准称取30~50g，干燥样品准确称取5~10g至于250ml烧杯，加入150ml水。加热至沸腾，并保持此状态1h。加热过程随时填补蒸发损失的水分。取出冷却，将杯中物质移入250ml容量瓶，用水洗涤烧杯，洗液并入容量瓶，最终定容至刻度，摇匀过滤，记录滤液体积。 3标准曲线制作：取试管8支，各加入12ml浓硫酸，置冰水浴中冷却后，分别将各种浓度的半乳糖醛酸2ml 徐徐各加入试管中，充分混匀后，再置冰水浴中冷却，然后置沸水浴中加热10min，迅速冷却至室温，各加入1ml 0.15%咔唑试剂，摇匀，与室温下静置30min，用0好使观众的溶液调仪器零点，在530nm波长下测定各管溶液的A530nm值，以A为横坐标，半乳糖醛酸浓度为纵坐标绘制标准曲线。 4测定：取果胶提取液用水稀释至适量浓度（含半乳糖醛酸10~70mg/L）。移取12ml 冰水冷却的浓硫酸加入试管中，然后加入2ml 样品稀释液，充分混合后，至于冰水冷却。取出后在沸水浴中加热10min，冷却至室温，加入1mL 0.15%咔唑试剂，摇匀，于室温下静置30min，用空白试剂调零，在530nm波长下测定A530nm值，与标样对照，求出样品果胶含量。 计算： 可溶性果胶质含量（以半乳糖醛酸计）= 说明：1糖分的存在对本法比色反应较大，使结果偏高，故样品中的糖分应预先出尽。 2硫酸浓度对显色有影响，操作时必须保持硫酸浓度一致。 果胶的测定（方案二）： 实验原理 本实验采用钙离子螯合剂和果胶酶提取水果中的总果胶物质，然后用分光光度法测定总果胶物质，先用乙醇处理样品，使果胶沉淀，再用乙醇溶液洗涤沉淀，除去可溶性糖类、脂肪、色素等物质，从残渣中提得果胶物质。采用NaOH溶液将果胶物质皂化，生成果胶酸钠，再经乙酸酸化使之生成果胶酸，再加入果胶酶使之水解。 分光光度法测定是以果胶分子的基本结构单位——半乳糖醛酸和咔唑的反应为基础的。果胶经水解生成半乳糖醛酸，在强酸中与咔唑发生缩合反应，生成紫红色化合物，其呈色强度与半乳糖醛酸含量成正比，测定的结果可用脱水半乳糖醛酸（AUA）。 实验仪器与试剂 仪器：玻璃器皿烧杯、试管、玻棒、胶头滴管、容量瓶、PH计、分光光度计 试剂：①果胶酶提取液：1份果胶酶试剂和10份水在一起搅拌1h，然后离心除去沉淀，上清液即为果胶酶提取液；②1%EDTA溶液（乙二胺四乙酸）；③醋酸溶液（1份醋酸+2份水）；④浓硫酸；⑤95%乙醇；⑥精制乙醇：在1L 95%乙醇中，加入4g锌粉和4ml硫酸（1+1），在水浴中回流24h，然后蒸馏，