《基因工程》重点范本.docVIP

基因工程重点 第一章 一、名词解释： 基因工程：基因工程是通过基因操作，将目的基因或DNA片段与合适的载体链接转入目标生物细胞，通过复制、转录、翻译外源目的基因以及蛋白质的活性表达，使基因生物获得新的遗传性状的操作。 基因操作：泛指对基因进行酶切、连接、转化等分子生物学操作，是基因工程的技术基础。 基因克隆：是指对基因进行分离和扩大繁殖等操作过程，其目的在于获得大量的基因拷贝，它在技术上主要包括载体构建、大肠杆菌遗传转化、重组子筛选和扩大繁殖等环节，很多时候并不涉及动物、植物等的转化及性状的遗传改良。 第二章 一、名词解释： 核酸酶：通过切割相邻两个核苷酸残基之间的磷酸二酯键，从而使核酸分子多核苷酸链发生水解断裂的酶。 限制性内切核酸酶（restriction endonuclease）：简称限制酶，是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并切割DNA双链结构的内切核酸酶。 限制-修饰系统： 黏性末端（sticky end）：指DNA分子在限制性内切核酸酶的作用下形成的具有互补碱基的单链延伸形成的末端结构，它们能够通过互补碱基间的配对而重新连接起来。 平末端（blunt end）：若限制性内切核酸酶在识别序列的对称轴上切割，形成的片段末端为平末端。 同切点酶（isoschizomer）：又称同裂酶，是一类来源于不同的微生物、能识别相同靶序列的限制性内切核酸酶。 同尾酶（isocaudamer）：来源各异，识别的靶序列也各不相同，但切割后能产生相同的粘性末端。 酶的星号活性（star activity）：限制性内切核酸酶识别和切割特异性位点是在特定条件下测定的。当条件改变时，许多酶的识别位点会改变，导致识别与切割序列的非特异性，这种现象称为星号活性。 DNA连接酶（DNA ligase）：能催化双链DNA片段靠在一起3羟基末端与5端磷酸基团末端之间通过形成磷酸二酯键，使两端连接的一种核酸酶。 DNA聚合酶:DNA聚合酶的作用是在引物和模板的作用下，把脱氧核糖单苷酸连续地加到双链DNA分子引物的3-OH末端，催化甘氨酸的聚合作用。 TaqDNA聚合酶：是一种耐热的依赖DNA的DNA聚合酶，Taq基因全长2496bp，编码832个氨基酸，相对分子质量约为94000，除具有5’→3’聚合酶活性外，还有5’→3’外切酶活性，但没有3’→5’外切活性，因而无3’→5’方向的校正功能。 反转录酶(reverse transcriptase):是依赖于RNA的DNA聚合酶，或称为RNA指导的DNA聚合酶，是分子克隆中重要的核酸酶之一。反转录酶普遍存在于含RNA的反转录病毒中，它以RNA为模板，催化合成互补的DNA单链，进而合成DNA第二条链。 末端脱氧核苷酸转移酶(TdT):，简称末端转移酶，一般是从小牛胸腺中提取的一种碱性蛋白，相对分子质量为3400。在末端转移酶催化下将脱氧核苷酸添加到DNA分子的3’-OH，伴随无机磷酸的释放。 碱性磷酸酶:能够催化核酸分子脱掉5’的磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。 外切核酸酶(exonuclease):是一类从多核苷酸链的末端开始逐个降解核苷酸的酶。 S1核酸酶:来源于米曲霉，是一种含锌的蛋白质，相对分子质量为32000，相对耐热，由nucO编码，可以高特异性地降解单链DNA和RNA，包括单链分子中的单链区域(如发卡结构)，反应产物为5’单核苷酸链，调节S1核酸酶的用量，可以切割双链DNA的单链缺刻，但它不能识别单个碱基对的错配。 脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNaseⅠ):简称DNA酶Ⅰ，是来源于牛胰脏的糖蛋白。它是一种需要二价阳离子的内切核酸酶，能从嘧啶核苷酸5’端磷酸基处随机降解单链或双链DNA，生成具有5’磷酸末端的寡核苷酸。当有Mg2+存在时，能在双链DNA上随机独立地产生切口；而在Mn2+存在时，则在双链DNA的大致同一位置上切割，产生平末端。 核糖核苷酸A(RNase A)：又称RNA酶A，是从牛胰脏中分离纯化得到的一种内切核酸酶，它可以特异性地攻击RNA上嘧啶残基的3’端，切割胞嘧啶或尿嘧啶与相邻核苷酸形成的磷酸二酯键，反应终产物是嘧啶3’磷酸和末端带嘧啶3’磷酸的寡核苷酸。 P13页的表2—1 二、思考题 1、Klenow片段和大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ有何异同？ 答：(1)Klenow片段是来自大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的大片段 (2)DNA聚合酶Ⅰ具有5’→3’聚合酶活性，3’→5’核酸外切酶活性，5’→3’核酸外切酶活性；Klenow片段只有5’→3’聚合酶活性，3’→5’核酸外切酶活性。 2、Ⅱ型限制性内切核酸酶的基本特性有哪些？ 答:Ⅱ型限制性内切核酸酶只有一种多肽，以同源二聚体的形式存在，其识别和切割DNA分子具有严格的特异性。①识别序列的特