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实验八 动物试验法 一、实验目的： 微生物实验室中常用的试验动物有家兔、豚鼠、小白鼠、鸽子、鸡等。本实验的目的在于学习实验动物的接种，采血以及剖检的方法。 二、实验器材： 1. 实验动物：小白鼠16只, 家兔1只； 2. 接种病料：多杀性巴氏杆菌菌液； 3. 10ml或20ml灭菌注射器1支， 1ml灭菌注射器6支和2个灭菌的12#或16#长针头(1.5寸)，酒精棉球若干； 4. 蜡盘(1个/组)，眼科镊，眼科剪（1套/组）； 5. 消毒水； 6. 显微镜，酒精灯，接种环，革兰氏染色液，瑞氏染色液，干净的玻片（2块/人）等。 三、实验内容： （一）多杀性巴氏杆菌的菌落形态及荧光观察 （二）小白鼠的剖检 （三）感染多杀性巴氏杆菌小白鼠新鲜病料涂片瑞氏染色镜检 （四）实验动物采血法 三、实验内容 (一）.多杀性巴氏杆菌的菌落形态及荧光观察 制备血清琼脂平板（加5-10%犊牛血清） 接种 37℃培养24h 观察 灰白色、圆形、湿润、露珠样小菌落， 于45度折光下观察生长的菌落，可见有桔红色的荧光（F0型菌落）或在低倍显微镜下观察可见菌落周围呈暗灰色。 三、实验内容： （二）小白鼠的剖检 1．先用肉眼观察动物体表的情况，并留心观察接种部有无变化。 2．将小白鼠尸体用3%来苏儿液浸泡1-3分钟。 3．将小白鼠尸体仰卧固定于蜡盘上，充分露出胸腹部。 4．以无菌剪刀自其颈部至耻骨部切开皮肤，并将四肢腋窝处皮肤剪开，剥离胸腹部皮肤使其尽量翻向外侧。 三、实验内容： （二）小白鼠的剖检 5．再用灭菌剪刀剪开腹腔，观察肝、脾及肠系膜淋巴结等有无变化。 6．可采取肝、脾（断面）、心血等直接涂片染色镜检。 7．将小白鼠尸体浸泡于3%来苏儿液中杀菌，最后再埋于深坑中，令其自然腐化。 三、实验内容： （三）感染多杀性巴氏杆菌小白鼠新鲜病料涂片瑞氏染色镜检 瑞氏染色法：抹片自然干燥后滴加瑞氏染色液于其上(为了避免变干，染色液可稍多加些)，经1-3分钟，再加约与染液等量的蒸馏水，轻轻显动玻片，使与染液混匀，经5分钟左右，直接用水冲洗，吸干或烘干，镜检。 细菌染色成蓝色，呈典型的两极着色，组织、细胞等物呈其它颜色。 三、实验内容： （四）实验动物采血法 小白鼠的采血法 鸡的采血法 家兔采血法 家兔采血法 ： ① 耳静脉 ② 心脏 ③ 颈动物放血 心脏采血的操作要点：将家兔以绳索将四肢固定，呈仰卧保定，术者在动物左前肢腋下处剪毛及局部消毒，在胸部心脏跳动最明显处下针。将针头直刺深入至心脏，感到针头跳动或有血液向针管内流入时，即可抽吸，一次可采血15-20毫升。 实验报告 1. 简述接种多杀性巴氏杆菌的小白鼠剖检方法。 2. 绘制感染多杀性巴氏杆菌小白鼠新鲜病料涂片瑞氏染色镜检图。 3.简述家兔心脏无菌采血的主要操作步骤。 * *