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高效液相 色谱仪的维护 制剂 王霞 简介组成 系统由储液器、 高压泵、进样器、 色谱柱、检测器、 记录仪等几部分组成。 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。 高效液相色谱仪操作步骤 1)． 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜. 2)． 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 3)． 打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。 4)． 进入hplc控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。 5)． 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。 6)． 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。 7)． 设计走样方法。点击file，选取se-lect users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。 8)． 进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。9)． 关机时，先关计算机，再关液相色谱。10)． 填写登记本，由负责人签字。注意事项：11)． 流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。12)． 柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。13)． 所有过柱子的液体均需严格的过滤。14)． 压力不能太大，最好不要超过2000 psi。  维护方法 液相色谱仪使用时要非常的注意 ? 使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。 液相色谱柱使用注意： 卡套柱的安装(加预柱)： 1．将卡套架套入柱芯 2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯(见下图) 3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片 4．将子弹头预柱放入卡套片内 5．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧 6．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端 平衡色谱柱：? ? 反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水过渡。 ? 如何平衡色谱柱？? ? 平衡过程中，将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡) ? 注意： ? ?在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。 如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。 色谱柱的维护： 1．使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度) 2．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围 3．避免流动相组成及极性的剧烈变化 4．流动相使用前必须经脱气和过滤处理 5．如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存大乙腈中 6．压力升高是需要更换预柱的信号 不使用时的维护 如果你的高效液相色谱仪将有很长时间不会用，一些维护是必不可少的。 首先，要清洗管路，避免里面有残留的盐导致析晶或者长菌。 其次，清洗管路后，要用有机相保存管路，避免色谱系统长菌。 最后，虽然长期不用，但还是要周期性的开下仪器让其运