实验七 实验注意事项课件.pptVIP

相对电导率测定 取根系或植物叶片，自来水洗净，蒸馏水冲洗干净，吸干表面水分。秤取1g，剪成长约1cm小段。 将材料装到30ml指形管内，加入去离子水15ml，抽真空至材料下沉，室温放置1~2h。测电导率R1。（用根系时可以不用抽真空） 将指形管沸水浴15~20min（注意加盖防止水分蒸发），以充分杀死植物组织，取出放入自来水中冷却至室温，测电导率R2。 相对电导率=R1÷R2×100% 植物含水量的测定 1、取成熟植物叶片，剪成适当大小，迅速称量鲜重Wf（~1g）。 2、将植物材料浸入蒸馏水并置于4℃冰箱中数小时至恒重（因植物材料而异） 。 3、将材料从水中取出，用吸水纸迅速吸去材料表面水分，称取其饱和鲜重Wfs。 （12h以上） 4、将上述材料放入一信封内，放入烘箱中，在105℃下杀青30min，然后将温度调到80℃烘至恒重。 5、称取材料干重Wd。 植物含水量的测定 * 实验七、逆境对植物的伤害及植物对逆境的适应性调节 实验原理 磺基水杨酸对脯氨酸有特定反应，当用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸溶液中。然后用酸性茚三酮加热处理后，茚三酮与脯氨酸反应，生成稳定的红色化合物，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下测定吸光度，即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量。 脯氨酸的测定 脯氨酸的测定 （一）材料及试剂 1. 材料：植物叶片。 2 .试剂及配制： 2.5﹪酸性茚三酮溶液配制：将1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml 6mol·L－1磷酸中，搅拌加热（70℃）溶解，贮于冰箱中。(配置的酸性茚三酮溶液仅在24 h内稳定，因此最好现用现配。 ) 3％磺基水杨酸配配制：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml。 100μg·mL-1脯氨酸标准母液配制：精确称取20mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，再倒入200ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度（为100μg·mL－1脯氨酸母液）。 冰醋酸；甲苯。 （二）实验步骤 1.???脯氨酸标准曲线的制作 用100μg·mL－1脯氨酸母液配制成0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10μg /mL的标准溶液。取标准溶液2mL，然后向各管分别加入2ml 3％的磺基水杨酸溶液，加入2ml冰醋酸及4mL 2.5﹪酸性茚三酮试剂，在沸水浴中加热1h，溶液即呈红色。冷却后加入4ml甲苯，摇荡30秒钟，静置片刻，取上层液 ，以甲苯溶液为空白对照，在520nm波长处测定吸光度（A）值。 OD值为纵坐标，脯氨酸浓度（ μg /mL ）为横坐标绘制标准曲线。 回归方程式 2. 样品的测定 2.1脯氨酸的提取 称取不同处理的植物叶片各0.5g，分别置大试管中，然后向各管分别加入5mL3％的磺基水杨酸溶液，在沸水浴中提取10min（提取过程中要经常摇动），冷却后3000r/min离心10min。取上清液待测。 2.2测定 吸取2ml提取液于带玻塞试管中，加入2mL 去离子水，2mL冰醋酸及4mL 2.5﹪酸性茚三酮试剂，在沸水浴中加热1h，溶液即呈红色。冷却后加入4mL甲苯，摇荡30秒钟，静置片刻。 用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，在520mm波长处测定吸光度（A）值。 从标准曲线上查出样品测定液中脯氨酸的含量，按下公式计算样品中脯氨酸含量： X × 提取液总量（mL） 脯氨酸含量（μg·g－1 Fw）＝ ————————————————— 样品鲜重（g）× 测定时提取液用量（mL） 公式中：X －从标准曲线中查得的脯氨酸含量（μg/mL） （三）计算结果 依据回归方程式计算得到脯氨酸含量（μg/mL） 自然含水量= ×100％ 相对含水量（Relative Water Content， RWC） 植物组织含水量的指标 RWC = 自然鲜重-干重 水饱和鲜重-干重 = ×100％ ×100％ 组织饱和含水量有较好的重复性，而组织的鲜重、干重不太稳定（鲜重常随时间及处理条件而有变化）。 * * * 植物水分状况对植物的生理活动具有重要影响。植物水分状况可以通过植物含水量、相对含水量、植物水势、渗透势得到体现。这些指标在植物水分生理的科学研究中或农业生产实践中经常见到。 水遇热蒸发为水蒸汽，可以用烘干法来测定植物组织中