631-蛋白质的沉淀反应课件.pptVIP

蛋白质的沉淀反应 一 目的 1 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 2 了解沉淀蛋白质的几种方法，以及蛋白质变性与沉淀的关系。 二 原理 在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颖拉可因失去电荷和脱水而沉淀。蛋白质的沉淀反应可分为两类。 1）可逆的沉淀反应：此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇(或丙酮)短时间作用于蛋白质。提纯蛋白质时，常利用此类反应。 2）不可逆沉淀反应：此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。加热引起的蛋白质沉淀与凝固，蛋白质与重金届离子或某些有机酸的反应都属于此类。蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在(如电荷)，并不析出。因此变性蛋白质并不一定部表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。 三 器材 1. .卵清蛋白 2.（NH4）2SO4晶体 3. 饱和（NH4）2SO4 4. 95%乙醇 5. 1%AgNO3 6. 1% CuSO4 7. 1%HAC 8 5%鞣酸 9 饱和苦味酸 10 NaCl晶体 五 操作 无机盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)浓溶液能析出蛋白质。盐浓度不同，析出蛋白质也不同。 如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。 取卵清蛋白溶液5毫升于试管中，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。将管内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止，此时析出的沉淀为清蛋白。取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，观察沉淀的再溶解。 2. 乙醇沉淀蛋白质 乙醇为脱水剂，破坏蛋白胶体的水化层而使其沉淀。 取卵清蛋白溶液1毫升，加入少许NaCl，待后者溶解后再加入95%乙醇2ml，观察现象。 3. 重金属盐沉淀蛋白质 金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。 取2支试管，各加入蛋白质溶液2ml，再各滴加1%AgNO3.和1% CuSO4至有沉淀产生。 4. 生物碱试剂 蛋白质与生物碱结构有类似之处，如含有含氮基团，故能被生物碱试剂沉淀。 取2支试管，各加入蛋白质溶液2ml，再各滴加5%鞣酸和饱和苦味酸数滴，观察沉淀。 * * 漏斗，滤纸 四 试剂 1. 盐析 操作 操作 操作 *