核苷磷酸酶.pptVIP

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2016-12-20 发布于重庆
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核苷磷酸酶.ppt

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* 核苷二磷酸磷酸水解酶鉴别方法张浩楠研究生学院 2010002 核苷二磷酸磷酸水解酶 Novikoff和goldficher法原理：采用金属法显示酶活性所在部位，其反应式如下孵育液的配制：次黄嘌呤核苷二磷酸钠盐 25mg 蒸馏水（溶解以上钠盐） 7ml 0.2M Tris苹果酸缓冲液（PH=7.2） 1ml 1%硝酸铅 3ml 0.025M 氯化锰 5ml 最终PH=6.5~7.0，新鲜配制，过滤方法与步骤 1.新鲜组织，冰冻切片 2.10%缓冲福尔马林固定30min 3.入孵育液，37℃，孵育15min 4.蒸馏水洗2次，3~4分钟 5.入1%硫化胺溶液2min 6.蒸馏水洗 7.甘油明胶或阿拉伯树胶封固结果与评价棕黑色沉淀为酶活性部位对照用抑制剂，如0.01M硝酸铀、10mM半胱氨酸、谷胱甘肽，则为阴性反应 *