植物细胞骨架的光学显微观察幻灯片.pptVIP

如作永久制片，可使样品，顺序通过如下试剂：50％乙醇，70％乙醇。95％乙醇，95％乙醇和叔丁醇混合液(1：1)，每次5一10分钟，或正丁醇→正丁醇二→甲苯二→甲苯，每次5—10分钟。然后捞取样品，平展于载玻片上，中性树胶封固。 用Triton处理较久的切片上没有核区轮廓，表明核骨架在形态分布上与细胞质骨架并无明显（至少在光镜下）差异，但由于细胞核有核纤层支撑的核膜，较难被去垢剂破坏，使去垢剂难以进入核中起作用，故需处理较长时间才能得到与胞质同样的效果。 对于去垢剂的提取作用，细胞质膜首当其冲，膜脂，膜蛋白必然很快溶解，但在显微镜下可见到紧贴细胞壁的包绕细胞质的一层结构（图1b），表明细胞除胞壁维持形态外，还有膜骨架（或膜内侧细胞骨架）起作用。而且膜骨架并非孤立起作用，可观察到它与胞质内部骨架系统通过与壁垂直的纤维相连。 * 植物细胞骨架的光学显微观察 观察光学显微镜下细胞骨架的结构，对细胞骨架的分布，膜骨架，核骨架，胞间连丝等进行初步的研究。 实验目的 实验原理 细胞内脂质和大部分蛋白质可与去垢剂Triton-100形成去垢剂-蛋白/脂质复合物，从而溶于水中被提取，细胞骨架蛋白与之结合成纤维状，保持其在生活细胞中存在的状态。之后用考马斯亮蓝R250 对蛋白质染色，使骨架系统在光学显微镜下可见，从而对其进行观察研究。 细胞骨架是指在细胞中支持和连接细胞各组分，与细胞运动有关的结构，参与胞内物质运输、细胞运动、分泌吸收、细胞通讯、有丝分裂等。包括微管、中间纤维、微丝。 实验用品 器材：显微镜、50ml烧杯、滴管、容量瓶、载玻片、盖玻片、镊子。 试剂：M一缓冲液, 6m mol／L PH6．8磷酸缓冲液。 1％Triton X一100，用M一缓冲液配 0.2％考马斯亮蓝R250，其溶剂是甲醇46.5ml，冰乙酸7ml，蒸馏水46.5ml。 3％戊二醛，用6m mol／L磷酸缓冲液(PH6．8)配制。 5％、7％、95％乙醇。 叔丁醇、正丁醇、二甲苯、树胶。 材料：洋葱鳞茎。 实验方法 (一)取洋葱鳞茎内表皮细胞(约lcm2大小)若干片温于装有PH 6．8 磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉。 (二)吸去磷酸缓冲液，用1％Triton X一100处理20—30分钟。 (三)吸去Triton X—l00，用M一缓冲液洗3次，每次10分钟。 ． (四)3％戊二醛固定0.5—1小时(对照组开始处理)。 (五)PH 6.8 磷酸缓冲液洗3次，每次10分钟。 (六)用0．2％考马斯亮蓝R250染色20—30分钟。 (七)用蒸馏水洗1—2次，材料置于载玻片上，加盖玻片，即可镜检。 植物细胞骨架微丝结构图 （10×10倍光镜下洋葱鳞茎内表皮细胞骨架（箭头示细胞核区域重染色区）） 10×40倍光镜下洋葱鳞茎内表皮细胞骨架（上方箭头示膜骨架，下方箭头示胞间连丝处骨架纤维） 谢谢观赏 WPS Office Make Presentation much more fun @WPS官方微博 @kingsoftwps *