保健食品中超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定.docVIP

保健食品中超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定 （本法参照GB/T5009·171-2003） 一、原理 将25℃时抑制邻苯三酚自氧化速率50%所需的SOD定义为一个活力单位。在碱性条件下，邻苯三酚会发生自氧化，可根据SOD抑制邻苯三酚自氧化能力测定SOD活力。 二、试剂 1、A液：PH8.20 0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）-盐酸缓冲液（内含1mmol/LEDTA·2Na）。称取1.2114g三羟甲基氨基甲烷（Tris）和37.2mgEDTA·2Na溶于62.4ml 0.1mol/L盐酸溶液中，用蒸馏水定溶至100mL。 2、B液：4.5mmol/L邻苯三酚盐酸溶液。称取邻苯三酚56.7mg溶于少量10mmol/l盐酸溶液，并定容至100mL。 3、盐酸溶液：10mmol/L 4、超氧化物歧化酶：0.200mg/mL 5、蒸馏水：二重石英蒸馏水。 三、仪器 1、紫外-可见分光光度计； 2、精密酸度计，0.01PH； 3、离心机； 4、10mL比色管； 5、10mL离心管； 6、玻璃乳钵。 四、测定步骤 1、取茶叶样品1.00g置于研钵中，加入9.0mL蒸馏水研磨5分钟，移入10mL离心管。用少量蒸馏水冲洗研钵，洗液并入离心管中，加蒸馏水至刻度，经4000r/min离心15分钟，取上清液测定。（澄清液体样品可取原液直接测定，浑浊液体样品经4000r/min离心15min, 再取上清液测定。） 2、在25℃左右，于10mL比色管中依次加入A液2.35mL，蒸馏水2.00mL，B液0.15mL。加入B液立即混合并倾入比色皿，分别测定在325nm波长条件下初始时和1min后吸光度值，二者之差为邻苯三酚自氧化速率△A325（min-1）为0.060。 3、SOD活性测定加样程序（表1） 表1 试液 空白 样液 SOD液 A液/mL 2.35 2.35 2.35 蒸馏水/mL 2.00 1.80 1.80 样液或SOD液/μL - 20.0 20.0 B液/mL 0.15 0.15 0.15 五、结果 1、结果计算 液体样品按式(1)计算： SOD活力（U/mL）=……………...………….(1) 式中： U/mL—SOD酶活力单位； △A325—邻苯三酚自氧化速率； △A′325—样液或SOD酶液抑制邻苯三酚自氧化速率； D—样液或酶液的稀释倍数； V—所加酶液或样液体积，mL。 计算结果保留三位有效数字。 2、固体样品按式（2）计算： SOD活力（U/g）=……………………….(2) 式中： V—加入样液或酶液的体积，mL； △A325—邻苯三酚自氧化速率； △A′325—样液或酶液抑制邻苯三酚自氧化速率； D—样液或酶液的稀释倍数； V1—样液总体积，mL； 4.5—反应液总体积，mL； m—样液的质量，mL。 计算结果保留三位有效数字。 3、精密度 在重复性条件下的两次测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。