动物细胞工程精华篇.pptVIP

动物细胞工程 3.动物细胞的培养过程 有关概念： 细胞接触抑制 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清等。） 3、温度和PH 36.5 +0.5度 ；PH为7.2-7.4。 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 植物组织培养和动物细胞培养的比较 5、存在的问题： 成功率非常低 绝大多数克隆动物存在健康问题 对克隆动物食品的安全性问题也存在争议 1、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？ 10代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型，未突变. 讨论 2、为什么选卵母细胞作核移植的受体细胞？ 卵母细胞体积比较大，容易操作； 卵母细胞的细胞质多，含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。 讨论 3、卵母细胞为什么要培养到MⅡ期？ 与MⅠ期的卵母细胞相比，MⅡ期的卵母细胞的细胞质已经成熟，可以支持胚胎的全程发育； MⅡ期的卵母细胞的细胞质中含有重组所需要的因子，而受精卵中的这些因子已经降解或用光 4、在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？ 为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的体细胞。 讨论 5.细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞。 不同的生活环境也会影响动物的习性 2.2 动物细胞工程 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 一、动物细胞融合 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 一、动物细胞融合 1.概念： 动物细胞融合（cell fusion）也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为杂交细胞。 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 一、动物细胞融合 2.诱导方法： 物理法： 化学法： 生物法： 灭活的病毒 电激等 聚乙二醇（PEG)等 仙台病毒 紫外线 丧失感染性 （不感染细胞） 保留融合活性 （诱导细胞融合） 3.融合过程： 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜融合 细胞融合，形成杂交细胞 植物细胞杂交与动物细胞融合的比较 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 主要用途 诱导方法 使用的酶 细胞融合方法 细胞融合原理 细胞膜的流动性细胞的全能性 细胞膜的流动性 纤维素酶、果胶酶 胰蛋白酶 物理（离心、振荡、 电刺激） 化学（聚乙二醇） 物理、化学方法（同左） 灭活的病毒 获得杂种植株 制备单克隆抗体 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 * 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体技术 核移植 动物细胞工程常用技术 皮肤烧伤，如果创面很小（不大于硬币）只要保持清洁，甚至深度烧伤，也可能自愈。如果下层真皮受损面积较大，常常需要植皮。植皮需要的健康皮片。植皮需要的健康皮片，可以取自烧伤病人自身未烧伤的部位（自体植皮），也可取自其他活人或尸体（异体植皮）等。自体植皮是永久性的，取自其他人或动物的植皮是暂时性的，是在创面愈合过程中为保护创面而采取的措施，10～14天后就要被身体排斥。 如果一个大面积烧伤的病人来说，自体皮肤有限，其他渠道的皮肤来源不足。如何才能获得大量的自体健康皮肤？ 人耳鼠 “人耳鼠”再出风头 2001年，一只特别的活老鼠在北京引起轰动——这是有着一对红眼睛的、尾巴长长的、浑身没毛的小白鼠。值得一提的是，这只小白鼠的背上，竟长着一只几乎与身子一般大小的“人耳”。这只老鼠背上的“人耳”是由上海市第九人民医院副院长、整复外科主任曹谊林教授利用组织工程技术复制出来的。 在京展出的数天，尽管门票高达20元，但还是有将近20万人，心甘情愿地掏钱一睹“人耳鼠”的风采。 人耳鼠的出现，透露了怎样的信息？ 2.2.1动物细胞培养与核移植技术 一、动物细胞培养 1.发展历史: 20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harrison)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后，在许多科学家的不懈努力下，动