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免疫分析试剂盒质量控制 广州市丰华生物工程有限公司 谭玉华 标准品: 标准品按其使用的范围不同可以分为三级: 1.国际标准品(international standards , IS) ,一级标准品。由世界卫生组织(WHO) 制备发放,供各国制备国家(地方) 标准品时对照使用。通常只发给各国政府指定的实验室,非卖品。然而这些实验室也有义务参加WHO 组织的国际标准品协作标定研究,无偿提供标定数据,且不得先于WHO 发表载有相关数据的论文。 2.国家标准品或地方标准品(national standards , NS , local standards) ,二级标准品。由各国自行制备、发放,根据国际标准品的效价确定国家标准品的效价。两种标准品应具有免疫学反应的同质性。国家标准品主要提供给各生产企业制备、标定厂级标准品时对照使用。 3.厂级标准品,三级标准品。由各试剂盒生产企业自行制备、使用,使用国家标准品的效价确定厂级标准品的效价。两种标准品应具有免疫学反应的同质性。厂级标准品主要用于校准试剂盒的“校准试剂”。 合格的校准试剂有3 个技术要点: 1.鉴定(identification) :校准试剂的原料首先要经过理化性质鉴定,包括分子量、化学结构、纯度等。也即是说,必须证明A 就是A ,而非B。对于市购多肽激素来说,应有比免疫活性(specific immunoactivity) 数据,最好还要有体内生物测定(bioassay in vivo) 数据。 2.标定(standardization) :校准试剂标定是指把它与“标准品”进行对比分析,然后确定它的效价(potency) 的实验过程。此处标准品可以是国家标准品或厂级标准品。标定实验首先要证明校准试剂与标准品在免疫学反应上是同质的,然后根据两者的效价比和校准试剂的标示量计算出校准试剂的效价。在书写实验记录时应注明两者的来源、批号、标示量、剂量单位等。 3. 剂量单位(dose unit) :按照《中华人民共和国计量法》的规定,我国采用法定计量单位。例如,物质的量的单位是摩尔(molarity , mol) ,质量单位是克(gram , g) ,容积单位是升(liter , L) , 对于暂时无法用物质的量或质量单位表示的物质,如垂体激素、胰岛激素和肿瘤标志物等可使用国际单位(international unit , IU) 或单位(unit , U) 表示。按照临床医学惯例,十进倍数和分数单位以103 倍数进位。pmol/ L、fmol/ L、ng/ L、μg/ L、mIU/ L、IU/L、KU/ L 等都是正确剂量单位。 质量控制样品: ①一致性:质控样品应尽量保持与病人或科研标本的一致。测定人的血清标本时只能用人血清而不能用动物血清做质控血清的基质。测人尿HCG标本时只能用人尿作质控样品的基质。采用动物血清做基质可能会更远离临床标本的实际情况。 ②剂量水平:质控样品中被测物质的浓度应设置在剂量- 反应曲线的工作范围内,最好在曲线的最佳位置上。 ③数量:质控样品应有足够的数量以供较长时间使用,这样可以监测放射免疫分析体系的远期重现性,避免因经常更换批号而带来的不利影响。 ④微生物致病因子:质控样品应无潜在的微生物致病因子。原料血清必须检测HBsAg 和HIV ,阴性者方可使用。 质量评价指标 1. 特异性(specificity) :特异性是指抗体与标准抗原(被测物质) 或与其类似物结合能力的大小。不同来源的抗体与结构类似物结合从而产生交叉反应是客观存在的，因此特异性检验是正确认识该试剂盒对结构类似物抗干扰能力的指标。 1) 特异性一般以交叉反应率(cross reaction rate) 表示。通常用被测物质及其类似物(analogue) 在剂量- 反应曲线上50 %结合率时两者化学量的比,以百分数表示。 2) 实际测量值：对于不能用物质的量表示的被测物，如糖蛋白激素FSH、LH、TSH和HCG，这4种激素具有相同的a亚单位，仅仅是a亚单位上部分氨基酸不同，实际操作中很容易产生交叉反应，而这4种激素又分别有各自的同形异构物，其量的表达方法还不能用物质的量(mol／L，ng／mL)表示，而只能借助于生物测定的活性单位(IU／L，mIU／L)表示，而每一种激素的活性单位(IU)又有完全不同的生物学意义，相互之间没有任何关联，即并且每一种激素定义的单位意义完全不同，不同来源相同质量的某一种激素的活性单位也不同，它们之间的交聚反应绝对不能甩交叉反应率表示，因此往往选择实测值表示。 3）选择交叉反应对照物：当交叉反应的测量结果高于我们期待的结果时，可以从两个方面分析：首先，该试剂盒抗