蛋白质化学2说课.pptVIP

色氨酸的 ?max＝280nm 酪氨酸的 ?max＝275nm， 苯丙氨酸的 ?max＝257nm， 依据：(1) 在等电点时，即当pH＝pI时， ① 所带净电荷为0，在电场中不移动。 　 ② 溶解度最小，最易沉淀。 例题2： 某氨基酸溶于pH7的水中，所得氨基酸溶液的pH值为8，问此氨基酸的pI是大于8、等于8还是小于8？ 氨基酸与2，4－二硝基氟苯的反应(Sanger反应） 氨基酸与异硫氰酸苯酯的反应( Edman反应 ） 与丹磺酰氯（DNS-Cl）反应 原理与DNFB法相同 但水解后的DNS-氨基酸不需分离，可直接用电泳或层析法鉴定 由于DNS有强烈荧光，灵敏度比DNFB法高100倍，比Edman法高几到十几倍 可用于微量氨基酸的定量测定 3、α-氨基与α-羧基共同参加的反应─茚三酮反应 * * (一) 氨基酸的结构 (三) 氨基酸的分类 (四) 氨基酸的理化性质 (二) 氨基酸的构型 三 蛋白质的基本组成单位──氨基酸 (amino acid) (四) 氨基酸的理化性质 1、一般物理性质 (1)溶解性：多数溶于水，但不溶或微溶于有机溶剂，在稀酸和稀碱中溶解性好。 (2)熔点：氨基酸的熔点一般都比较高，一般都大于200℃，超过熔点以上氨基酸分解产生胺和二氧化碳。 (3)旋光性：除甘氨酸外的其他氨基酸均有旋光性。 (4)光吸收：氨基酸在可见光范围内无光吸收，在近紫外区域(220-300nm)含苯环氨基酸有光吸收。 波长∕nm 摩尔吸收系数ε 2、氨基酸的两性解离和等电点(pI) 经证实，氨基酸在晶体或水中主要是以两性离子(或偶极离子)的形式存在，如下图所示： 氨基酸在水中的两性离子既能像酸一样放出质子，也能像碱一样接受质子，氨基酸具有酸碱性质，是一类两性电解质。 起碱(质子受体)的作用： 起酸(质子供体)的作用： 不同pH时氨基酸以不同的离子化形式存在： 正离子 两性离子 负离子 氨基酸所带净电荷为“零”时，溶液的pH值称为该氨基酸的等电点（isoelectric point），以pI表示。 (净电荷为正) (净电荷为零) (净电荷为负) 当溶液的pH=pI时，氨基酸主要以两性离子形式存在。 当pHpI时，氨基酸主要以正离子形式存在。 当pHpI时，氨基酸主要以负离子形式存在。 在一定的pH范围内，氨基酸溶液的pH离等电点(pI)愈远，氨基酸所携带的净电荷愈大。 正离子 两性离子 负离子 pH＜pI pH=pI pH ＞pI pI的用途及应用的依据 (2) 在同一pH条件下，不同氨基酸的带电性质及带电量不同。 pI的用途：分离、纯化和鉴定氨基酸或蛋白质制剂。 等电点(pI)的计算 某氨基酸的等电点pI值，即可由该氨基酸两性离子状态两侧的基团pK值(即解离常数的负对数)的算术平均值得出。 其中pK可由氨基酸的酸碱滴定确定。 pK值就是指某种解离基团有一半解离时的pH， pK值小则酸性强。 等电点推导计算 示例 中性氨基酸：以Gly为例。当氨基酸完全质子化时，可看作是多元酸。 pH=（pK1+pK2）/2 pI=（pK1+pK2）/2 pI =（2.34+9.60）/2=5.97 Gly K1= [Gly±] [H+] [Gly+] K2= [Gly- ] [H+] [Gly±] pI时， [Gly+ ] = [Gly- ] [Gly±] [H+] K1 = [Gly±] K2 [H+] [H+]2=K1K2 ， -lg [H+]2 = -lg K1 -lg K2 两边取负对数得， K1 K2 酸性氨基酸，以天冬氨酸（Asp）为例： CH―NH3+ COO? CH2 COOH H+ K1 H+ K2 H+ K3 CH―NH3+ COO? CH2 COO? CH―NH2 COO? CH2 COO? Asp? Asp= CH―NH3+ COOH CH2 COOH Asp+ Asp+ ? pIAsp= 2 pK1+pK2 = 2 1.88+3.65 = 2.77 碱性氨基酸，以赖氨酸（Lys）为例： H+ K1 H+ K2 H+ K3 Lys? COOH CH―NH3+ (CH2)4 NH3+ COO? CH―NH3+ (CH2)4 NH3+ COO? CH―NH2 (CH2)4 NH3+ COO? CH―NH2 (CH2)4 NH2 Lys+ + Lys+ Lys + ? pILys = 2 pK2+pK3 = 2 8.95+10.53 9.74 = 各