培训课件--胶体金常用的生物材料.pptVIP

夹心法 双抗原夹心法 用特异性抗原进行包被和标记，以检测相应的抗体。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高，特异性也较强。 同时双抗原夹心法能检测总的抗体量，即IgM,IgG,IgA等的量；既可检测人血清抗体，亦可检测动物血清抗体，对人兽患病的检测更有价值，实现了同一种试剂测不同种属抗体。 但需要注意HOOK效应。 HOOK效应 此现象在标本受检抗原/抗体的含量很高时出现。具体原因是：抗原/抗体在和标记抗体/抗原结合的同时，过量的抗原/抗体也和包被抗体/抗原结合，从而将一部分的结合位点占住，导致前段形成的复合物一部分不能结合到包被膜上，出现了显色变浅的情况。 用高亲和力的单克隆抗体或抗原制备此类试剂可削弱钩状效应。 双抗体夹心法 用特异性抗体进行包被和标记，以检测相应的抗体。标记抗体由于起到了捕抓的功能，加上标记工艺的影响，要求的纯度也较高，一般使用的是单克隆抗体，而包被端既有单抗又有多抗。 在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。 如抗体的来源为抗血清，包被和标记用的抗体最好分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被和标记。这种双位点夹心法具有很高的特异性。 双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子（RF）的干扰。RF是一种自身抗体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF，它可充当抗原成份，同时与固相抗体和标记抗体结合，表现出假阳性反应。采用F（ab）或Fab片段作标记结合物的试剂，由于去除了Fc段，从而可消除RF的干扰。 双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。 间接法 间接法 间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体等）与标本中的目标抗体结合，形成复合物，再层析到检测区和相应的抗原结合，从而显色反应。 本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。 间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一标记抗抗体建立检测相应抗体的方法。 标记抗体也可使用Protein A,因其能与各种动物血清的IgG反应，所以可用在间接法中进行检测。 间接法成功的关键在于抗原的纯度。虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结果，但应尽可能予以纯化，以提高试验的特异性。特别应注意除去能与一般健康人血清发生反应的杂质，例如以E.Coli为工程酶的重组抗原，如其中含有E.Coli成份，很可能与受过E.Coli感染者血清中的抗E.Coli抗体发生反应。 抗原中也不能含有与标记抗人Ig反应的物质，例如来自人血浆或人体组织的抗原，如不将其中的Ig去除，试验中也发生假阳性反应。另外如抗原中含有无关蛋白，也会因竟争吸附而影响包被效果。 捕获法 第一种说法： 胶体金检测中，一般是通过捕获法检测IgM，其原理是膜上包被特异性抗原，金垫上标记有抗人IgM抗体，通过抗人IgM抗体捕获标本中的IgM抗体，再在膜上结合反应显色。 第二种说法： 包被抗人IgM抗体，标记抗抗原抗体，抗原为白金，检测标本中的IgM抗体。 此法常用于病毒性感染的早期诊断。如甲型肝炎病毒（HAV）抗体的检测 间接法一般仅适用于检测总抗体或IgG抗体。如用抗原包被的间接法直接测定IgM抗体，因标本中一般同时存在较高浓度的IgG抗体，后者将竞争结合固相抗原而使一部份IgM抗体不能结合到固相上。因此如用抗人IgM作为二抗，间接测定IgM抗体，必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处理，以除去IgG的干扰。 竞争法 竞争法测抗原　　小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的标记抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的标记抗体愈少，最后的显色也愈浅。小分子激素、药物等测定多用此法。 竞争法测抗体 其原理为标本中的抗体和一定量的标记抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上的标记抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。 竞争法测抗体有多种模式，可将标本和标记抗体与固相抗原竞争结合，抗HBc 一般采用此法。另一种模式为使用中和抗原，标本中的抗体和标记抗体竞争和中和抗原结合，形成复合物后，再与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。 三、结果判读模式 根据上面提到的几种反应原理，胶体金诊断试剂产生了一些常见的结果判读模式。具体如下： 1）CT线对比进行结果判读，品种有LH,FSH,TSH,PSA。判读方式为：T线比C线深或同等深度，判为阳性； T线比C线浅或不出，判为阴性。 2）T线是否