培训课件--肿瘤个体化分子病理检测和临床应用.pptVIP

谢 谢！ 肿瘤组织标本采集后进行组织切片，然后可行病理学评估。肿瘤组织标本包括固定包埋组织和新鲜/冰冻组织。固定包埋组织的手术标本可得足量肿瘤DNA，但DNA片段化；小活检标本可得肿瘤DNA量少且片段化。新鲜/冰冻组织的手术标本是最好的标本，可得高质量肿瘤DNA；小活检标本量少，但肿瘤DNA质量仍好。组织切片过程包括取一张切片HE染色用于病理评估，其余白片用于提取DNA；建议手术标本切片数量为5μm×4，小活检标本为5μm×8。病理学评估可对非小细胞性肺癌进行诊断并判断其病理类型；测序法至少要有50%的肿瘤细胞，ARMS法至少2%的肿瘤细胞，且是在不考虑遗传异质性的情况下。细胞总数至少要超过200个才能确保肿瘤细胞的数量足够用于突变检测，且标识肿瘤丰富的区域富集肿瘤细胞用于突变检测。 这张流程图详细介绍了胸水标本的处理流程：收集胸水50-500ml，室温250g离心10分钟，吸去上清，沉淀物分为三部分处理，分别为低温保存、酒精固定涂片及福尔马林固定切片。 低温保存是指沉淀物-80℃保存。酒精固定涂片是将沉淀物均匀涂玻片，于室温晾干，涂片区域滴加75%酒精，于室温晾干，之后于常温运输涂片。福尔马林固定切片则是将沉淀物用棉絮纸包裹，用0.1%水性伊红漂染1秒，之后用10%中性福尔马林固定24-48小时，后续处理与组织标本相同。 山东省医学科学院附属医院病理科 杨香山 肿瘤个体化分子病理检测及临床应用 一、开展肿瘤个体化分子病理检测的意义 二、分子病理检测的标本选择 三、分子病理检测的方法 四、分子病理检测的项目 一.开展肿瘤个体化分子检测的意义 --个体化分子诊断是个体化治疗的基石。 --靶向治疗是为攻击特异性靶分子而设计，所以用药前，必需检测患者是否存在对应的靶点，才能发挥其疗效。 卫生部原发性肺癌诊疗规范 (2011)----- -- IV期肺癌在开始治疗前，建议先获取肿瘤组织进行表皮生长因子受体(EGFR)是否突变的检测，根据EGFR突变状况制定相应的治疗策略。 中国肿瘤界正在致力于推动肿瘤个体化分子病理诊断的规范化，同时也希望临床能够与病理科紧密配合，共同实现规范化诊断、规范化治疗的目标，以造福患者。 外科手术标本(石蜡切片） 10 um X2 切片 活检标本（石蜡切片） 10um X4 切片 穿刺标本（新鲜组织） 至少芝麻粒大小 胸腹水标本 不少于10mL。 二.分子病理检测的标本选择 --尽量避开肿瘤间质、出血灶、坏死物质等 --肿瘤细胞所占的比例也是必须要考虑的因素。 --目前尚不清楚满足分子学检测需要的最低限度肿瘤细胞的数量。 --获得质、量俱佳的肿瘤标本是EGFR检测的重要前提条件，涉及到从临床标本采集到完成最终检测实验等多个环节。 --离体后及时（30分钟内）固定于10%中性缓冲福尔马林液中。 --固定时间：小标本6-12h ，大标本6-48h 。 肿瘤组织标本 病理学评估 组织切片 非小细胞性肺癌诊断及病理类型 足够的肿瘤细胞比例：测序法，至少50%肿瘤细胞；ARMS法，至少2%的肿瘤细胞 (不考虑遗传异质性) 足够多的肿瘤细胞总数：200个肿瘤细胞 标识肿瘤丰富的区域富集肿瘤细胞 取一张切片HE染色用于病理评估 其余白片用于提取DNA 建议切片数量： —手术标本，5 μm×5 —小活检标本，5 μm×10 固定包埋组织 手术标本：可得足量肿瘤DNA，但DNA片段化 小活检标本：可得肿瘤DNA量少且片段化 新鲜/冰冻组织 手术标本：最好标本，可得高质量肿瘤DNA 小活检标本：量少，但肿瘤DNA质量仍好 肿瘤组织样本的采集及病理评估 Pirker R, et al. J Thorac Oncol 2010; 5(10):1706-1713. 1. Data on file. 2. Kimura H, et al. British Journal of Cancer 2006; 95(10):1390-1395. 3. Zhang X, et al. Lung Cancer 2008; 60(2):175-182. 4. Soh J, et al. Int J Cancer 2006; 119(10):2353-2358. 胸水标本处理流程 收集胸水50-500ml 室温1000转离心10分钟，吸去上清 沉淀物-80℃保存 沉淀物均匀涂玻片 室温晾干涂片 涂片区域滴加75%酒精 室温晾干涂片 常温运输涂片 沉淀物用棉絮纸包裹 0.1%水性伊红漂染1秒 10%中性福尔马林固定24-48小时 后续处理与组织标本相同 低温保存 酒精固定涂片 福尔马林固定切片 三.分子病理检测的方法 基因试剂盒 价格适中、灵敏度，特异性高、所需时间短。