植物组织培养5.ppt

一、花药培养 低温预处理的作用机理，学者们提出以下几点：  B、双层培养 C、条件培养基培养 4.影响雄核发育的因子 营养需要：正常情况下，在一个小孢子中只发生2次有丝分裂，但雄核发育涉及到反复的多次分裂。 药壁因子：大量的证据表明,在花粉胚发育过程中花药壁起着重要的作用。Pelletier和Ilami 1972 通过一系列的移植实验证明，即使把一个品种烟草的花粉移植到另一个品种的花药中，前者也能顺利地发育成胚。 诱导雄核发育的花粉发育时期：与r-RNA合成有关的基因，在花粉第一次有丝分裂之后似乎会“关闭”大约24小时。因此只有刚刚通过第一次有丝分裂的小孢子，才能被诱导进行孢子体方式的发育 5、花药培养中单倍体形成的途径 根据小孢子最初几次分裂的方式，可将离体条件下雄核发育的途径分为四种。 第一种途径：单核小孢子进行一次均等分裂，形成两个等同的子细胞，而不是形成 相互有别的营养细胞和生殖细胞。两个等同的子细胞都参与孢子体的发育。 第二种途径：单核小孢子先进行一次正常的非均等分裂，然后通过营养细胞的进一步分裂形成孢子体。生殖细胞或者完全不再分裂，或者分裂1~2次后即行退化。这种发育途径在烟草、大麦、光叶曼陀罗、辣椒中都普遍存在。 第三种途径： 在天仙子中，花粉胚主要是由生殖细胞单独形成的，营养细胞或是完全不再分裂，或只分裂有限几次即停止。无论在哪种情况下，营养细胞最终都变成一个类似胚柄的结构，附着在由生殖细胞起源的胚的胚根一端。 第四种途径：如在第2种途径中一样，形成一个营养细胞和生殖细胞。但在这种情况下，两个细胞都进一步参与孢子体的形成。这种雄核发育途径迄今还只见于南洋金花。  6、花药培养的意义 c.节省田间试验的土地和劳力 d.克服远缘杂种不育性与分离的困难 e.单倍体的应用潜力 f.与细胞融合相结合 g.作为遗传工程受体更为有效 2．植物胚乳的发育特性?  §5. 组织培养常见问题及对策 （三）、生根阶段  ?②早熟萌发 early mature sprouting 幼胚接种后，离体胚不继续胚性生长，而是在培养基上迅速萌发成幼苗，通常称之为早熟萌发（未经完成正常的胚胎发育过程而形成幼苗的现象叫早熟萌发）。在大多数情况下，一个幼胚萌发成一个植株，但有时会由于细胞分裂产生大量的胚性细胞，以后形成许多胚状体，从而可以形成许多植株，这种现象就是所谓的丛生胚现象。 ③愈伤组织 callus 在许多情况下，幼胚在离体培养中首先发生细胞增殖，形成愈伤组织。一般来讲由胚形成的愈伤组织大多为胚性愈伤组织，这种胚性愈伤组织很容易分化形成植株。 （3）离体幼胚培养的影响因素①培养基胚的成熟程度不同，所用培养基的类型也不同。成熟胚的培养基有：Tukey、White等。未成熟胚有：Rijven、Nitch、MS等。培养基的渗透压对幼胚培养至关重要，渗透压的调节主要依赖糖。常用的是蔗糖，不同发育时期的胚要求蔗糖的浓度不同，胚龄越小糖浓度要求越高。确定适宜蔗糖浓度的方法是在接种前将幼胚剥出后放入若干浓度的蔗糖溶液中，观察质壁分离现象，以确定等渗溶液的浓度。 ②附加物： a、AA类，无论是单一的还是复合的AA都能刺激胚的生长。最有效的是Gly，常用的有Gly、Ala、Glu、Asp。CH是一种AA复合物，有抑制早熟萌发和促进未成熟胚发育的作用 b、维生素类。维生素对初期幼胚一般是必需的，但有时也有抑制作用，最好在实验证实后使用。 c、天然提取物。常用各种胚乳汁、酵母提取物 d、生长调节剂 ③环境条件 对于幼胚培养，初期弱光和黑暗更适宜，幼胚启动发育后给予和其自然光周期一致的光照条件有利于幼胚发育。 培养的温度一般以该植物种子萌发的适宜温度为好。④培养材料 植物培养材料的基因型和胚发育程度对离体胚培养有重要影响。显然，材料基因型不同，胚培养的难易程度也不同。胚发育阶段以越幼嫩的胚越难以培养。 二.子房培养 ovary culture 子房培养包括授粉前和授粉后的子房培养。 授粉前子房培养是为了获得孤雌生殖的单倍体植株，适用于那些胚囊分离特别困难的植物； 授粉后子房培养适用于那些获得种子特别困难，胚分离不易操作的植物，以获得种子或果实或植株。 1．材料的选择 （1）品种间的差异 （2）胚囊发育时期：以八核胚囊和成熟胚囊期的子房培养具有较高的诱导频率。 成熟胚囊 三核花粉期 八核胚囊 二核花粉期 单核至四核胚囊 单核靠边期 大孢子四分体 单核中期 胚囊发育时期 花粉发育时期 大麦胚囊发育时期与花粉发育时期的相关性 2．培养基? （1）基本培养基 不同培养基对于子房培养产生愈伤组织的诱导率有直接影响，比较常用的培养基是N6、BN、MS，禾本科作物以N6培养基较常用，其它