胰岛素肠道用药治疗糖尿病新方法探索——.docVIP

胰岛素肠道用药糖尿病新方法探索—— 大肠杆菌肠内表达胰岛素对血糖水平的调节作用摘要：目的： 模拟大肠杆菌肠内表达胰岛素以调节血糖水平，探讨胰岛素肠道用药糖尿病新方法。方法：4组家兔，分为生理盐水注射组、胰岛素注射组、胰岛素+大肠杆菌混合液注射组、大肠杆菌培养液注射组，观察给药前后不同时间血糖水平，比较各组血糖水平变化情况。结果：发现胰岛素注射组、胰岛素+大肠杆菌混合液注射组家兔给药后60 min内血糖水平持续降低，后开始上升，最终240 min后维持在正常水平；生理盐水注射组、大肠杆菌培养液注射组，给药后60 min血糖水平保持相对平稳，240 min后血糖水平明显下降，前两组与后两组在240 min的血糖水平差异明显。结论：胰岛素＋大肠杆菌注射组具有明显的降血糖作用，说明胰岛素可以在小肠内吸收，达到降血糖作用。大肠杆菌肠内表达胰岛素调节血糖水平 关键词：糖尿病 大肠杆菌 胰岛素 新方法 I型糖尿病（即胰岛素依赖性糖尿病）属于自身免疫紊乱性疾病，在全世界范围内有数百万的患者，其中约10％的病例属于I型糖尿病。在1型糖尿病患者的血液中可查出多种自身免疫抗体，如谷氨酸脱羧酶抗体（gad抗体）、胰岛细胞抗体（ica抗体）等。这些异常的自身抗体可以损伤人体胰岛分泌胰岛素的β细胞，使之不能正常分泌胰岛素，进而引发I型糖尿病。 II型糖尿病（即非胰岛素依赖型糖尿病），患者自身可以产生胰岛素，但因为细胞膜上受体发生病变，细胞无法对胰岛素做出反应。II型糖尿病的遗传易感性较I型强，且更为复杂，但其机制尚不完全清楚。目前认为它是多基因遗传背景在多种环境因素的作用下造成不同程度的胰岛素分泌障碍和胰岛素抵抗并存的疾病，病程进展缓慢或反复加重，中晚期常伴有一种或多种慢性并发症，多数患者在早中期可用控制饮食和口服降糖药控制血糖，有些人终生不需依赖胰岛素治疗而生存，但有很大一部分患者在在中后期仍需给予外源性胰岛素补充始能控制血糖。 Leroith等发现有一种大肠埃希菌（E.coli）能够产生胰岛素样物质，该物质可以进入血液与胰岛素的靶细胞结合封闭胰岛素受体，使胰岛素不能发挥作用，血糖无法被利用，导致糖尿病。 人的健康除受自身基因的调控和外界环境的作用外，还受肠道菌群的影响。肠道菌群的代谢产物，有的直接在肠道内发挥作用，有的被吸收进入循环系统，到达一定的靶器官，结合相应受体，对机体产生影响。通过改造大肠杆菌基因组，在大肠杆菌基因组中引入人胰岛素原基因，使之在肠道内表达，经吸收进入血液循环到达靶器官发挥生物学效应，可以作为糖尿病等各种因蛋白类、肽类激素缺乏而导致疾病的治疗新手段。本实验拟通过模拟大肠杆菌肠内表达胰岛素以此来调节血糖水平，探讨治疗糖尿病的新方法。 1 药品、仪器及动物 1.1药品：短效胰岛素（40单位/mL，诺和诺德公司生产）；葡萄糖测定试剂盒（上海荣盛生物技术有限公司生产）；生理盐水（新疆华世丹药业股份有限公司生产）；大肠杆菌+胰岛素混合液 1ml ；大肠杆菌培养液（1ml）；葡萄糖（1ml）；脱毛剂（硫化钠）。 1.2 仪器：血糖仪。 1.3实验动物: 家兔，雌性，4只，体重1.9-2.2kg（新疆医科大学动物实验中心）。 2 实验方法 2.1 将家兔分为4个组并依次编号为1-4号：分别为生理盐水注射组、胰岛素注射组、胰岛素+大肠杆菌混合液注射组、大肠杆菌培养液注射组。给药前90、60、30 min分别用血糖仪测定各组家兔血糖值，每个时间段测量三次，取平均值。 2.2 所有家兔左下腹注射1ml葡萄糖，之后每30 min用血糖仪测量血糖值，一直到家兔血糖值达到峰值。 2.3 家兔血糖值达到峰值后每组家兔分别开腹，第一组在肠内注射生理盐水1ml，第二组肠内注射胰岛素1ml，第三组肠内注射胰岛素+大肠杆菌混合液1ml，第四组肠内注射大肠杆菌培养液1ml。 2.4 各组家兔每隔30 min分别测量血糖值。 实验结果表明，四组家兔给药前血糖水平存在个体差异，注射葡萄糖后血糖峰值出现的时间及血糖峰值也存在个体差异。但家兔血糖值达到峰值后每组家兔分别开腹，肠内注射各组相应药物，发现生理盐水组和大肠杆菌组注射后60 min血糖水平保持相对平稳，但注射后240 min血糖值明显下降发现胰岛素注射组和胰岛素＋大肠杆菌注射组注射后60 min血糖值明显下降，之后逐渐上升至240 min后血糖值达到正常水平，尤其是胰岛素＋大肠杆菌注射组240 min后血糖值下降更为明显前两组与后两组在240 min的血糖水平差异明显。提示，胰岛素＋大肠杆菌注射组具有明显的降血糖作用，证明大肠杆菌内表达胰岛素调节血糖水平。结果见表1、图1表1 各组家兔给药前后血糖变化情况 分组 血糖值（mmol/L） 给药前 注射葡萄糖前（1h） 注射葡萄糖前（2h） 给药后（