寄生虫免疫终极版.docVIP

第一章 寄生虫抗原及其应用 在寄生虫与宿主的相互关系中，寄生虫抗原引起宿主产生免疫应答，特别是那些存在于寄生虫体表或分泌排泄物内的抗原，与宿主的免疫细胞直接接触，具有重要的免疫原性。 寄生虫抗原的化学构成： 多肽 蛋白质 糖蛋白 脂蛋白 多糖 核酸 一、按照免疫学标准分类 1.功能性抗原 （1）宿主保护性抗原 （2）免疫诊断抗原 （3）免疫病理抗原 （4）寄生虫保护性抗原 2.按照在不同宿主的免疫原性进行分类 （1）自然抗原 使宿主在自然感染的情况下或者对自然宿主进行免疫接种时使宿主机体产生免疫反应的抗原。 （2）新抗原 又称为异源抗原，非自然宿主的免疫接种和非相容性宿主的免疫接种用抗原。 3.半抗原 在一定环境条件下寄生虫产生的载体决定簇，主要引起细胞免疫的非正常活动。 二、按寄生虫学标准分类 1.来源和定位 （1）可溶性外抗原 （2）可溶性体抗原 （3）虫体抗原 2.按照虫群的生活史分类 （1）虫特异性抗原 属特异性抗原 种特异性抗原 株特异性抗原 期特异性抗原 蜕皮抗原 三、按生物学标准进行分类 1.按照组成成分 蛋白质 脂肪 糖类 核酸 2.按照特性分类 大小 链结构 决定簇数目 类型 3.按照分子功能分类 酶 代谢物 受体 识别结构 4.未来抗原的来源 在各种媒介体内克隆的DNA的表达 化学合成 抗-独特型抗体抗原 第二节 寄生虫抗原的分离、纯化和鉴定 一、寄生虫抗原的分离 1.虫体抗原 收集虫体，洗净表面粘附物，在磷酸缓冲液中之称匀浆，离心后的上清即为可溶性虫体抗原。 球虫 2.ES抗原 排泄分泌抗原 由培养寄生虫的培养液中经过浓缩、层析分级获得。可用于免疫诊断。 3.膜抗原 主要成分是膜蛋白，分为膜表面蛋白和膜组成蛋白。 膜表面蛋白通过用金属螯合物或高离子强度的缓冲液溶解，然后通过分级处理获得。 膜组成蛋白可以用清洁剂、有机溶剂溶解并分级处理获得。 二、纯化 通过物理的、化学的方法，利用寄生虫抗原的物理化学特性进行组分分离的过程称为寄生虫抗原的纯化。 常用有以下3类方法 1.凝胶层析 凝胶层析是一种以分子大小为基础的分离技术，凝胶中每个颗粒的细微结构的小孔使被分离组分在流经途径上出现差别，大分子物质首先从孔外经过，首先被洗脱出来，其次是较小的组分，最后是小分子物质。 常用的载体： 交联葡聚糖 琼脂糖凝胶 聚丙烯酰胺凝胶 2.离子交换层析 离子交换层析是用离子交换剂（具有离子交换性能的物质）作固定相，利用它与流动相中的离子能进行可逆的交换性质来分离离子型化合物的层析方法。 ?? 即溶液中的离子同离子交换剂上功能基团交换反应的过程。 原理： 依靠静电吸引溶液中带相反电荷的离子结合，利用待分离的各种蛋白质的等电点或所带电荷的不同而引起的与载体结合力不同和进行区分。 注意点： 要将样品中各组分分别洗脱，必须改变洗脱液的离子强度和PH，以提高解脱吸附的能力。 带电荷量少，亲和力小的先被洗脱下来，带电荷量多，亲和力大的后被洗脱下来。 考虑因素： 1.被分离物质带何种电荷 2.被分离物质分子的大小 大分子物质选用凝胶，其次选用纤维素 3.被分离物质所处的环境 4.被分离物质的物理化学性质 5.被分离物质的大概数量 根据分离过程的实验条件 强酸强碱—应用广泛 弱酸型—只能在碱性pH范围内使用 弱碱型—只能在酸性pH范围内使用 缓冲液的选择 原则：不能发生化学反应，所带电荷应与样品一致。避免使样品变性 洗脱剂 原则：所用洗脱液比吸着物质具有更活泼的离子或基团 改变pH或离子强度 ?增强洗脱液与离子交换剂的结合力 ?降低分离物与离子交换剂的结合力 洗脱方式：梯度洗脱 3、亲和层析 亲和层析 affinity chromatography 将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中，当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时，与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附，直接流出，从而与被分离的蛋白质分开，然后选用适当的洗脱液， 改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来，这种分离纯化蛋白质的方法称为亲和层析。 原理 　　亲和层析是一种吸附层析，抗原（或抗体）和相应的抗体（或抗原）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原（或抗体）固相化后，就可以使存在液相中的相应抗体（或抗原）选择性地结合在固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到分离提纯的目的。 载体的基本要求和选择 理想的载体应具有下列基本条件： ①不溶于水，但高度亲水； ②惰性物质，非特异性吸附少； ③具有相当量的化学基团可供活化； ④理化性质稳定； ⑤机械性能好，具有一定的颗粒形式以保持一定的流速； ⑥通透性好，最好为多孔的网状结构，使大分子能自由通过； ⑦能抵抗微生物和醇的作用。 三.鉴定 1.