GelRed基本问答.docVIP

GelRed/GelGreen基本问答 美国技术关于marker跑电泳出现分辨率不高现象： 经过比对多家的maker产品，证实Invitrogens 1kb Plus DNA Ladder 与Gel Red匹配度最好。 Gel Red比EB分子大（也是由于大分子特性，所以不会透过细胞膜进入人体产生伤害，染料的结合原理都是一样的）。大分子的染料在预制胶中对DNA的迁移有一定影响，但是不确定对那种类型的DNA迁移影响严重。采用后染法，不会破坏胶中的DNA样本，保证了DNA迁移的真实水平。不同于EB，你不用在对染后的胶进行脱色。 针对预制胶电泳拖带、不清晰的建议： 鉴于GelRed的高灵敏性，建议减少DNA的上样量。 建议把GelREed再稀释一倍后使用，但过低会影响结果的灵敏性。 用1XTBE缓冲液代替TAE，因为含硼酸盐的试剂导电性能更好。 GelRed＆GelGreen常见问题： Q: 污染或微笑的DNA条带或错误的DNA迁移条带? A: 许多客户为方便使用GelRed预制凝胶。但GelRed和GelGreen是为安全而设计的分子量较大的高效亲和型染料，在预制凝胶电泳中它们可以影响DNA的迁移。如一些限制性酶切的DNA样本，可能会在GelRed预制凝胶中异常迁移。下列建议可能会提高预制凝胶中的条带分离效果。 减少DNA上样量。污染和微笑条带往往是过量的DNA样本造成的。推荐的泳道和已知浓度的样品的上样量为50-200ng/泳道。对于未知浓度的样品，尝试1/2或1/3的常用上样量 减少GelRed在凝胶中的总量，比如用0.5X的浓度来代替1X的浓度。 制百分比浓度小的琼脂糖凝胶。高分子量的DNA在低百分比的琼脂糖凝胶分离效果比较好。 更换电泳缓冲液。 TBE缓冲液比TAE缓冲液的效果更好。 为了避免染料可能对DNA迁移的干扰，我们建议使用电泳后染胶。如果跑胶程序需要的上样量超过推荐量，建议使用电泳后染色法。 Q： 荧光弱，时间久染料性能降低，或使用后染法染料仍然在琼脂糖凝胶中。 A : 染料可能从溶液中沉淀。 加热GelRed至45 - 50℃，2min，搅拌溶解。 染料在室温下储存，以避免沉淀。 Q: 后染法需要去除染料的步骤吗？A: 不需要，不过高背景的结果可以考虑适当脱色步骤 Q： GelRed和GelGreen可以用来染色单链DNA或RNA吗？A: GelRed和GelGreen可用于单链DNA和RNA的染色，但GelRed染单链核酸效果比GelGreen敏感5倍左右。使用荧光酶标仪的滴定实验表明， GelRed绑定单链DNA和RNA荧光信号约是结合双链DNA的一半左右。 Q： 用那些仪器检测GelRed和GelGreen？A: GelRed完美兼容标准（302或312nm）紫外透射成像仪。GelGreen的吸光度在250-300 nm和吸收峰在500纳米左右。 GelGreen兼容254 nm的紫外透射或可见光激发的凝胶成像仪，如Dark Reader或488 nm凝胶激光扫描仪。 Q： 什么样的发射滤波片 Q: 可以提前制作GelRed / GelGreen凝胶，储存供以后使用吗？A: 可以，GelRed和GelGreen染料是稳定的。在保证琼脂糖凝胶的完整性不会被破坏的前提下，你可以将预制的GelRed / GelGreen凝胶储存供以后使用。 我们建议在4℃避光贮存凝胶。 Q： GelRed / GelGreen在熔化的琼脂糖中稳定么？可以将GelRed / GelGreen储存在熔化的琼脂糖胶中，到用的时候在制备凝胶吗？A: 可以，GelRed比GelGreen更加稳定。但我们不建议将GelRed放在熔化的琼脂糖中存放几天。 Q: GelRed /GelGreen的预制凝胶可以重复使用吗？A: 不可以，我们不建议GelRed / GelGreen凝胶电泳后重复使用，因为连续电泳会减少染色强度。 Q: 可以重新融化GelRed / GelGreen凝胶，再制备吗？A: 是的，但最好再添加一些染料，保证重新制备凝胶的信号强度。 Q： GelRed和GelGreen用后应该如何处置？A: GelRed和GelGreen通过EPA环保监管局22个指标测试。GelRed和GelGreen已经被相关部门批准，可以直接倾倒入下水道。然而，由于地方规定的差异，您可以请联系您当地的安全监管部门，获取相关条例。详情请查阅GelRed / GelGreen安全报告信息。 Q: GelRed及GelGreen与如克隆，连接和测序的下游扩增子兼容吗？A: 可以。我们建议使用Qiagen公司或Zymoclean凝胶提取试剂盒，EXO-SAP方案，或酚