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转基因植物分子检测技术
转基因植物分子检测技术姜桐桐,2,黄凤兰1,2*,陈晓凤1,2,赵永1,2,李佳会1,2,周婷婷1,常旭丰1,刘佳琪1(1.内蒙古民族大学生命科学学院.内蒙古通辽 028000; 2.内蒙古自治区高校蓖麻产业技术研究中心.内蒙古通辽 028000 3内蒙古自治区高校蓖麻育种重点实验室.内蒙古 通辽 028000)摘要:分子生物学和植物基因工程技术不断发展,转基因分子检测技术也得到不断发展,本文介绍了外源基因整合的检测技术和外源基因表达的检测技术,细致的描述了每种检测技术的原理和优缺点。关键词:分子检测技术;转基因植物;原理Transgenic plant molecular detection technologyTongtong jiang1.2 Fenglang Huang1.2 * xiaofeng chen1.2 Yong Zhao1.2 Jiahui Li1.2Tingting Zhou1 Xufeng Chang1 Jiaqi Liu1College of Life Science, Inner Mongolia University for the Nationalities, Tongliao city,028000;2.Inner Mongolia RegionIndustrial Engineering Research Center of Universities for Castor, Tongliao city,028000;3 The Inner Mongolia autonomous region castor breeding, key laboratory of colleges and universities, Tongliao city,028000)Abstract:With the continuous development of molecular biology and plant gene engineering and transgenic molecular detection technology development, this paper introduces the foreign gene integration testing technology and exogenous gene expression detection technology, detailed describes the principle and advantages and disadvantages for each testing technology.Keywords:molecular detection technology; The transgenic plants; The principle of 近年来,转基因植物检测技术日趋成熟,多角度的多方面的检测方向分别从DNA、RNA、蛋白质来对转基因植物进行检测,无论从外源基因整合的方向,还是外源基因表达的方向,都能检测出正确的结果。(一)外源基因整合的检测对转基因的检测和功能鉴定尤为重要。对于转基因检测,我们主要是对是否为转基因、转的什么成分。检测主要针对外源基因整合的检测,常采用PCR检测和Southern杂交。PCR由Mulhs等人于1985年发明[1],1988年由于耐热DNA聚合酶的发现,使PCR走向实用阶段,Mulhs因发明PCR获1993年诺贝尔奖。1 PCR检测基本原理:PCR反应的成分是模板DNA(待扩增DNA)、引物、4种脱氧核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和适宜的缓冲液等,过程分为四个连续的反应,其目的是把能够微量的遗传物质在数小时之内扩增达到检测水平,进而完成分析和检测。PCR技术的基本原理是:第一个阶段是在93~94 ℃高温条件下将DNA 模板变性,即模板变性解链;第二个阶段是退火[2],即我们人工合成的上、下游引物与模板 DNA 链 3’端经降温至 55 ℃退火;第三个阶段是延伸,即4种脱氧核苷酸(dNTPs)同时存在的情况下,借助Taq DNA 聚合酶的作用,引物链将沿着 5’-3’方向延伸与模板互补的新链。此次循环过后,合成新链可将其作为 DNA 模板继续反应,由此循环进行。循环进程中,扩增产物增加,我们所需要的DNA产物可达到l00 万~200 万倍[3]。PCR 反应的原理简单,但是具体的操作是复杂的,各种条件对PCR反应具有很大的影响,如退火温度的确定、延伸时间的长短以及循环数等。因此,不同的反应体系应该确定适当的反应条件,以避免假阴性或假阳性等情况的产生。1.2 优缺点:常规PCR对技术和设备的要求不高,操作简便,成本低,不需要同位素比较,可以保持所检测的目的基因的
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