第十章 高效液相色谱分析法 第三节 高效液相色谱固定相与流动相.pptVIP

第十章高效液相色谱法;1、分配色谱（液－液色谱）固定相 ⑴ 全多孔型固定相（大孔填料，既有大孔，也有小孔） 由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体；早期 采用100μm的大颗粒，表面涂渍固定液； ⑵ 表面多孔型固定相（薄壳型微珠固定相） 30-40μm的玻璃微球，表面附着一层厚度为1-2μm的 多孔性活性物质（硅胶、氧化铝、分子筛）后，涂渍固定液。 粒度均匀，重现性好；但柱容量低，对检测器要求高；;⑶ 化学键合固定相; 主要类型有: a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N;化学键合固定相的特点：;2、吸附色谱（液－固色谱）固定相 主要有：硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺， 全多孔型和薄壳型，粒度小于10 μm。 3、离子交换（离子交换色谱）固定相 ⑴薄壳型离子交换树脂固定相 薄壳玻璃珠为担体，表面涂离子交换树脂。 ⑵离子交换键合固定相 离子交换树脂键合在硅胶表面，形成固定相。 阳离子交换树脂和阴离子交换树脂。;4、空间排阻（凝胶渗透）色谱 一般分为三类： ⑴软质凝胶 葡聚糖凝胶、琼脂凝胶等多孔网状结构的物质，可溶涨 至本身体积的许多倍。一般是水为流动相，主要用于常压分 离，不适合于高压分离。 ⑵半硬质凝胶 主要由聚苯乙烯和二乙烯基苯交联而成，也称之为有机 凝胶；溶涨性小于软质凝胶。 ⑶硬质凝胶 多孔硅胶和玻珠等，孔径恒定，粒度分布较窄。具有化 学稳定性好，热稳定性好，机械强度大，不易粉碎，流动相 性质影响小等优点。是目前常用的凝胶渗透色谱固定相。;5、手性固定相 主要用于分离手性异构体。 手性异构体的分离已成为液相色谱的重要内容之一。 用得较多的手性固定相主要有环糊精和手性冠醚。; 1、流动相特性 （1）液相色谱的流动相又称为：淋洗液/洗脱剂/洗脱液。流动相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况； （2）亲水性固定液常采用??水性流动相，即流动相的极性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。 （3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。 ;2、流动相类别;3、流动相选择;4、选择流动相时应注意的几个问题