实验四--食品中大肠菌群的测定课程方案.pptVIP

实验四 食品中大肠菌群的测定;一、实验目的;二、实验原理;最近似数测定法（MPN）是指对未知样品做连续的10倍稀释，选择3个连续的10倍稀释液，每种稀释液接种3管装有培养基的试管中培养，根据LST初发酵试验以及BGLB发酵证实实验，证实大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每g（mL）样品中大肠菌群的最可能数。 食品中大肠菌群数以每g（mL）样品中大肠菌群的最可能数来表示，即为大肠菌群MPN值。;三、实验器材;四、实验准备;2、月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤（LST）培养基：300mL 分装到27个已装有杜氏小管试管中，10mL/个 包扎（3支一捆），112~115℃灭菌30min 胰蛋白胨 6g NaCl 1.5g 乳糖 1.5g K2HPO4 0.825g KH2PO4 0.825g 十二烷基硫酸钠 0.03g 水 300mL pH 6.8;3、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）培养基：150mL 分装到12个已装有杜氏小管试管中，10mL/个 包扎，112~115℃灭菌30min 蛋白胨 1.5g 乳糖 1.5g 牛胆粉溶液 30mL 0.1%煌绿水溶液 2mL 水 150mL pH 7.2 牛胆粉溶液制法：将3g牛胆粉溶于30mL水中，调pH至7.0~7.5 BGLB制法：先将蛋白胨、乳糖溶于约100ml水中，加入牛胆粉溶液30mL，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液，最后用水补足到150ml，用纱布过滤后，再分装到试管中。;（二）其它器具（每个组准备） 移液管 10mL 1支/组 1mL 10支/组;五、实验步骤;3、选择10-2、10-3、10-4三个稀释度的样品均液，用无菌移液管分别吸取1mL到LST发酵液试管中，每个稀释度做3个平行（共9管）。 4、37℃培养48h 5、观察LST管中小倒管里是否有气泡。如有气泡，则继续按照下述要求实验；如无气泡，则是大肠阴性管（-）;6、如LST小倒管中有气泡，则按照无菌操作要求，用接种环将产气LST发酵液接种到BGLB试管中，一只产气LST发酵液对应一只BGLB试管。 7、37℃培养48h 8、观察BGLB小倒管中是否有气泡，如有气泡，则记为大肠阳性管（+）；如无气泡，则记为大肠阴性管（-）。;大肠菌群计数检验流程;9、根据经确证后的对应浓度阳性管数查MPN表，报告样品中大肠菌群MPN值。;五、实验结果与分析;六、思考题