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1.DNA粗提取和鉴定的原理 (1)DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,即2 mol/L NaCl可溶解DNA,0.14 mol/L NaCl可析出DNA。 (2)DNA不被蛋白酶水解: 加入嫩肉粉,可将蛋白质水解,得到DNA。 (3)DNA不溶于酒精:加入冷却的体积分数95%的酒精可析出DNA、除去杂质。 (4)DNA可被二苯胺染成蓝色,以此鉴定DNA(需沸水浴加热)。 2.DNA的粗提取和鉴定方法 (1)材料的选取:选用DNA含量相对较高的生物组织。 (2)破碎细胞 ①动物的红细胞,吸水破裂。 ②植物细胞:加入洗涤剂、食盐后研磨。 (3)除去杂质的方法 方法一:利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的不同,通过调节_________________除去溶于和不溶于NaCl溶液中的杂质。 方法二:利用DNA对酶的耐受性,直接在滤液中加入嫩肉粉,反应10~15 min,嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解_______,而不会破坏_____。 NaCl溶液的浓度 DNA 蛋白质 方法三:利用DNA对高温的耐受性,将滤液放在60~75 ℃的恒温水浴箱中保温10~15 min,使_______变性沉淀而______分子还未变性。 (4)DNA的析出:向处理后的滤液中加入与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液(体积分数为95%),静置2~3 min,溶液中会出现白色丝状物,用玻璃棒沿一个方向搅拌,卷起丝状物。 (5)DNA的鉴定:在沸水浴的条件下,DNA遇二苯胺会被染成_______。 蛋白质 DNA 蓝色 (1)关于DNA的实验,请判断正误(2015·广东卷,3) ①用兔的成熟红细胞可提取DNA( ) ②DNA溶液与二苯胺试剂混合,沸水浴后生成蓝色产物( ) ③用甲基绿对人的口腔上皮细胞染色,细胞核呈绿色,细胞质呈红色( ) (2)提取细胞中的DNA和蛋白质都需用蒸馏水涨破细胞(江苏,23A)( ) (3)用不同浓度NaCl溶液反复溶解与析出DNA可去除蛋白质(江苏,23B)( ) 错混诊断 答案 (1)①× ②√ ③× (2)× (3)√ 提示 (1)①兔的成熟红细胞无细胞核及各种细胞器。③用甲基绿对人的口腔上皮细胞染色只能使细胞核呈绿色,不能使细胞质呈红色。(2)提取植物细胞中的DNA不能用涨破法。 题组 DNA的粗提取与鉴定 1.(2012·江苏卷,18)下列关于“DNA粗提取与鉴定实验”的叙述,正确的是( ) A.洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度 B.将DNA丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝 C.常温下菜花匀浆中有些酶类会影响DNA的提取 D.用玻棒缓慢搅拌滤液会导致DNA获得量减少 解析 洗涤剂能够瓦解细胞膜,但不能增加DNA的溶解度,A错误;将DNA丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴中变蓝,不需要冷却,B错误;常温下菜花匀浆中有些酶可破坏DNA,影响DNA的提取,C正确;用玻棒缓慢搅拌滤液并不影响DNA的含量,而在粗提取时,缓慢搅拌有利于DNA附着,D错误。 答案 C 2.请回答下列关于DNA粗提取和鉴定的问题。 (1)DNA提取过程可以使用鸡血或者菜花,使用鸡血时,需在鸡血中加入________,目的是____________。在________中加入蒸馏水,目的是____________。 (2)使用菜花提取DNA时,需先研磨,研磨时可加入一定的洗涤剂和食盐,其作用分别是__________________和________。 (3)本实验中可用到嫩肉粉,起作用的是其中的______。 (4)使用体积分数为______的______酒精可使DNA析出。最后,使用______对DNA进行鉴定,水浴加热冷却后溶液呈蓝色。 答案 (1)柠檬酸钠 防止血液凝固 鸡血细胞液 使鸡血细胞破裂 (2)使细胞膜破裂 溶解DNA (3)蛋白酶 (4)95% 冷 二苯胺试剂 “DNA的粗提取与鉴定”实验和“血红蛋白的提取与分离”实验中都常常用到红细胞,但前者往往采用鸡血细胞,后者一般采用哺乳动物的血红细胞。原因是鸡血细胞核的DNA含量丰富,材料易得,且极易吸水涨破;哺乳动物成熟的血红细胞中不含有细胞核和多种细胞器,其中的血红蛋白含量丰富,适宜用于血红蛋白的提取与分离实验。 1.(2014·江苏高考,18)下列关于加酶洗衣粉的叙述,正确的是( ) A.高温易使酶失活,因此冷水洗涤去污效果应该比温水好 B.洗衣粉中表面活性剂对碱性蛋白酶活性有一定的促进作用 C.在pH低于7.0的自来水中,碱性蛋白酶依然能起作用 D.洗衣粉中酶主要是通过快速分解溶在水里的污渍发挥作用 考点二 酶的应用 典例引领 解析 加酶洗衣粉中的酶在水温45~60 ℃时,能充分发挥洗涤作用,水温高于
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