微生物菌种鉴定与保藏剖析.pptxVIP

1 微生物菌种鉴定与保藏 柳志强 浙江工业大学生物工程研究所 2008·7 microliu@2 内容 菌种筛选 菌种鉴定 菌种保藏 3 微生物代谢产物的平板检测方法 4 5 6 7 影印法 8 显微镜 第一代 第二代 第三代 9 细菌的形态和结构观察 在显微镜下观察细菌个体的形态 细菌形态受培养时间、培养基成分、浓度、培养温度、培养时间等发生变化。 10 细菌菌落大多表面光滑湿润，有光泽，一般菌落较小，质地颜色均匀，同培养基结合不紧密。菌落特征与组成菌落的细胞结构、生长状况、排列方式、好气性和运动性直接相关。 11 细菌个体微小，较透明，必须染色方可呈现。根据细菌个体形态观察的不同要求，可将染色分为3种类型：简单染色、鉴别染色、特殊染色。 12 放线菌菌落在培养基上着生牢固，与基质结合紧密，难以用接种针挑取。 放线菌细胞一般呈分枝无隔的丝状，菌丝体分为在培养基内部的基内菌丝和伸出培养基表面的气生菌丝。气生菌丝上部分化成孢子丝，呈螺旋状、波浪状或分枝状。菌丝呈各种颜色，有的能分泌水溶性色素到培养基内。孢子丝长出孢子，孢子形状各异。由于孢子的存在使菌落表面呈干粉状。 13 霉菌是由交织在一起的菌丝体构成。菌丝呈管状，有的有横隔将菌丝分割为多细胞（如青霉、曲霉），有的菌丝没有横隔（如毛霉、根霉）。菌丝直径比一般细菌和放线菌菌丝大几倍到几十倍。菌落形态较大，质地疏松，颜色各异，有丝状、绒毛状或蜘蛛网状的菌丝体。 将菌丝体放在水中易变形，将其置于乳酸石炭酸溶液中，保持菌丝体原形。 14 几类酵母的菌落形态 1.酿酒酵母 2.产肮假丝酵母 3.出芽短梗霉 4.多孢丝抱酵母 5.荚复膜孢酵母 6.解脂复膜孢酵母 7.季也蒙有孢汉逊酵母 8.碎囊汉逊酵母 9.卡氏酵母 10.鲁氏酵母 11.深红酵母 12.玫红法佛酵母 13.大型罗伦隐球酵母 14.美极梅奇酵母 15.浅红酵母 15 16 一些鉴别培养基 17 来源于不同微生物的抗生素 放线菌产生 链霉素、红霉素、四环素、利福霉素 庆大霉素、麦迪霉素、林可霉素等 真菌产生 青霉素、头孢菌素C等 细菌产生 多粘菌素、杆菌肽等 目前已筛选出抗生素达9000种以上，每年还新增百余种。投入生产的仅百余种。 菌种—发酵工业的核心 18 Current Methods of Identification 19 BIOLOG自动微生物鉴定系统 20 检测原理 BIOLOG以检测微生物细胞利用不同碳源进行新陈代谢过程中产生的酶与四唑类物质（如TTC、TV）发生颜色反应和浊度差异为基础，运用独有的显型排列技术检测出每种微生物的特征指纹图谱，在大量试验和数学模型基础上，建立起指纹图谱与微生物种类相对应的数据库。检测时通过智能软件将待鉴定微生物的图谱与数据库参比，即可得出鉴定结果。 21 鉴定步骤 分离纯化 平板扩大培养 制备菌悬液 调整浊度 接种培养 获取结果 22 The Bacterial Identification Process 23 The Fungi Identification Process 24 Pure Cultures are Important Krieg, Bergey’s Manual, 1986 25 挑取菌落 用木制接种棒挑取分离良好的单菌落 26 BIOLOG常用消耗品 Microlog1 Microlog2 Microlog3 (Microstation) 培养基 BUG，BUA BUG，BUA BUG，BUA，BUY 鉴定板 GN2,GP2,AN GN2,GP2,AN GN2,GP2,AN,YT,FF 接种液 GN/GP-IF AN-IF GN/GP-IF AN-IF GN/GP-IF AN-IF,FF-IF 其它通用消耗品 疏基乙酸钠，水杨酸钠，试管架，吸嘴，加样槽，一次性移液管，长棉签，木制接种棒。 27 微生物鉴定 （95种碳源） 微生物研究 GN2　鉴定革兰氏阴性好氧菌 GP2　鉴定革兰氏阳性好氧菌 AN　 鉴定厌氧菌　 YT　 鉴定酵母菌 FF　 鉴定丝状真菌 SF－N2　用于革兰氏阴性放线菌和真菌代谢研究 SF－P2　用于革兰氏阳性放线菌和真菌代谢研究 ECO　　用于微生物特性和群落分析研究（31） MT2　　用于微生物代谢研究（不含碳源） ES　　 用于埃希氏大肠杆菌沙门氏菌的研究 　　　 （95种碳源） 鉴定板种类 28 29 30 Electron micrograph of strain ZJB-05174