项目三《药物稀释法与管碟法的抗菌试验》.docVIP

深圳技师学院应用生物系 《抗生素抗生素 抗生素抗生素（antibiotics）是由微生物（包括细菌、真菌、放线菌属）或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其它活性的一类次级代谢产物，能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质。现临床常用的抗生素有微生物培养液液中提取物以及用化学方法合成或半合成的化合物。目前已知天然抗生素不下万种。Micrococcus luteus ） 培养基：营养肉汤培养基，营养琼脂培养基，抗生素效价2号培养基，0.9％Micrococcus luteus ）冻干粉一支自然解冻，准备一瓶灭菌好的营养肉汤100ml，无菌操作，（37℃,24h）摇床培养。 1.2琼脂斜面：取复苏好的藤黄微球菌（Micrococcus luteus ）用接种环顶点沾一下在灭菌好的斜面划线（37℃,24h）培养即可。 1.3菌液制备：从上面斜面的培养物中（用接种环顶点沾一下即可）接种于5ml肉汤培养基中，经37℃培养18h，用直径3mm的接种环取一环菌液接种于5ml肉 汤培养基中，经37℃培养6h即可，4℃保存。 1.4找到藤黄微球菌适合的梯度：从上面斜面的培养物中（用接种环顶点沾一下即可）接种于5ml肉汤培养基中，经37℃培养18h，用直径3mm的接种环取一环菌液接种于5ml肉 汤培养基中，经37℃培养6h取出，在无菌操作下，用生理盐水稀释至，取，，做细菌总数计数。 稀释梯度至，细菌总数计数表 1 无法计数 158 44 2 无法计数 144 52 平均菌落数 无法计数 151 48 结论：由稀释梯度至，细菌总数计数表可知，为我们所需要的梯度。 一．试管法（无菌操作） 2.药物稀释法 2.1预实验（2批）：取营养肉汤100ml，试管10支，第一管加药物1ml+9ml肉汤充分混合，第二管取第一管中1ml+9ml肉汤混匀，第三管取第二管1ml+9ml肉汤混匀，以此类推至第九管，取出1ml弃去，第十管不加药，只加了营养肉汤9ml。稀释完毕后，十管的药物稀释度为，，…，，及阴性。 2.2菌液制备：在上述的1.3中，菌液制备最后所得的菌液中取1ml用营养肉汤作为稀释剂梯度稀释至，用灭过菌的移液枪每管加0.05ml，第九管不加菌作为阴性对照，第十管不加药物加菌为阳性对照。加完菌后充分混匀，经37℃培养18h后判断结果。 药物稀释法找出最大抗菌效价表，加菌量为0.05ml 结果 阴性 阳性 第一批 －－＋＋＋＋＋＋－＋－－＋＋＋＋＋＋－＋－＋℃培养18h后判断结果。 药物稀释法扩大梯度范围找出更加准确的抗菌效价表 结果 1：10 1:100 1:200 1:400 1:800 1:1000 阴性 阳性 第一批 －－－－＋＋－＋－－－－＋＋－＋－－－－＋＋－＋－－－－＋＋－＋－－－－＋＋－＋－－－－＋＋－＋－－－－＋＋－＋℃） 7、记录结果 管碟法测定最大抗菌效价表 1:10 1:100 1:200 1:400 1:800 1:1000 第一批 ＋＋＋＋－－＋＋＋＋－－＋＋＋＋－－＋＋＋＋－－ 250 12.5 6.25 3.125 2.5 备注：“＋－