一轮专题基因工程课件教师版资料.ppt

6．(2011·江苏高考)请回答基因工程方面的有关问题： (1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似(如图所示)。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。 ①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为________。 ②在第________轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。 (2)设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如下图)，请分别说明理由。 答案：(1)①15/16　 ②三 ①第1组：__________________________________________ ②第2组：______________________________________ ①引物Ⅰ和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效　 ② 引物Ⅰ′自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效　 (3)PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为_____________________________________________。 DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上 (4)用限制酶EcoRV、MboⅠ单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如图(1 kb即1000个碱基对)，请在指定位置画出质粒上EcoRV、MboⅠ的切割位点。 解析：(1)①根据PCR过程的特点绘制PCR过程示意图如图所示，由图可知，由原来的每条母链为模板合成的两个新DNA分子中，只含有引物A或引物B，而以新合成的子链为模板合成新DNA分子时，两种引物都含有，故第四轮循环共产生16个DNA分子，其中含有引物A的分子是15个，占15/16。 ②由图示可知，第一、二轮循环合成的子链长度均不同，根据半保留复制特点可知，前两轮循环产生的四个DNA分子的两条链均不等长，第三轮循环产生的DNA分子存在等长的两条核苷酸链，如图。 (2)在第1组引物中，引物Ⅰ的部分碱基序列是CAGGCT，引物Ⅱ的部分碱基序列是AGCCTG，若利用这两个引物进行DNA扩增，会因其中的部分碱基发生碱基互补配对而使引物失效。在第2组引物中，引物Ⅰ′的部分碱基序列是AACTG和CAGTT，该引物一旦发生自身折叠，也将会出现部分碱基发生碱基互补配对而使引物失效。(3)图中直接将两个脱氧核苷酸合成DNA单链，这不是DNA聚合酶的功能。DNA聚合酶只能在DNA模板存在的条件下，将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上。 (4)根据图示，该质粒为环形质粒。用限制酶EcoRⅤ单独切割该质粒时，只形成一个片段，说明该质粒上只有1个限制酶EcoRⅤ的识别位点。用限制酶MboⅠ单独切割该质粒时，形成两个片段，说明该质粒上有两个限制酶MboⅠ的识别位点。用限制酶EcoRⅤ和MboⅠ联合切割该质粒时，形成三个片段，其中有一个片段的长度与用MboⅠ单独切割该质粒时产生的片段长度相同(2.5 kb)，另外的两个片段是5.5 kb和6 kb，这说明限制酶EcoRⅤ的切割位点存在于用MboⅠ单独切割该质粒时产生的另一片段(11.5 kb)上。 答案：(1)①15/16　②三 (2)①引物Ⅰ和引物Ⅱ局部发 生碱基互补配对而失效　② 引物Ⅰ′自身折叠后会出现 局部碱基互补配对而失效　 (3)DNA聚合酶只能将单个脱 氧核苷酸连续结合到双链 DNA片段的引物链上 (4)见右图 7、(2011·海南高考)回答有关基因工程的问题： (1)构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生________末 端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生________(相同、不同)黏性末端的限制酶。 (2)利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是________。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用________处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为________。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成________，常用抗原—抗体杂交技术。 [答案]　(1)平　相同　 (2)驱动胰岛素基因转录出mRNA　CaCl2溶液(或Ca2＋)　分子杂交技术　蛋白质 (3)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的________中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的________上。 [