罗非鱼眼透明质酸的提取。纯化及抗氧化性研究资料.pptVIP

小 结 微波结合H2O2+VC降解工艺的最佳条件为：温度60 ℃、H2O2: Vc为1: 1、H2O2的添加量为2~4 mmol·L-1、降解pH4，30 min，降解得到的HA相对分子量小于2 KDa，可根据需要改H2O2: Vc、 H2O2添加量、pH制备特定分子量LMWHA。 LMWHA葡萄糖醛酸含量34.96%，略低于HA；其红外光谱与HA类似，说明该工艺对透明质酸的基本结构未造成破坏；紫外光谱260 nm处出现微弱吸收，该吸收可能缘于降解产生的不饱和键，总体来看该降解工艺对HA结构破坏较小，是一种良好的降解HA的方法。 罗非鱼眼透明质酸的降解研究 低分子量透明质酸的制备及其抗氧化性研究 研究要点 1低分子量透明质酸的制备 2低分子量透明质酸的抗氧化性研究 二、 LMWHA的制备： 低分子量透明质酸的制备及其抗氧化性研究 随着酶作用时间的增加HA的得率呈现先上升后下降的趋势，在第5 h达到最大值 二、 LMWHA的结构分析： 红外光谱 紫外光谱 增加酶的用量，HA的得率也随之增加，酶用量达到7500 U·g-1时HA的得率最大 低分子量透明质酸的制备及其抗氧化性研究 LMWHA1的还原力远大于后三者，在不同的浓度下均差异性显著（P0.05） DPPH LMWHA1的清除效果最好，明显大于其他三者，各浓度条件下均差异性显著（P0.05） 还原力 还原力 还原力 二、 LMWHA的体外抗氧化研究： 低分子量透明质酸的制备及其抗氧化性研究 不同分子量大小的LMWHA均有较强的清除羟自由基的能力，且清除能力差异性较小，差异性不显著（p0.05） ·OH 低分子量透明质酸的制备及其抗氧化性研究 低分子量透明质酸的制备及其抗氧化性研究 利用微波结合过氧化氢+抗坏血酸法降解罗非鱼眼透明质酸，制备不同相对分子量的LMWHA，并通过红外光谱、紫外光谱分析其结构变化。 通过研究LMWHA对?OH 、DPPH自由基的清除作用以及还原力来考察LMWHA的抗氧化能力。结果显示，随着LMWHA分子量的减小其对DPPH的清除率以及还原力增大，而对?OH的清除率减小，这种差异可能与LMWHA清除自由基的机理有关。 罗非鱼眼透明质酸的提取纯化及特性分析 总 结 最佳的工艺条件为：超声波功率200 W、超声处理15 min、复合酶（胰蛋白酶和复合蛋白酶的酶活力比1:1的混合物）、酶作用3 h、温度40 ℃、pH 9.0、酶用量6000 U·g-1，利用此工艺条件提取HA得率为11.44%； 通过CTAB络合、超滤、透析以及HiTrapTM DEAE FF 离子交换柱层析法对HA粗品进行纯化，最终产品纯度为97.47%，紫外图谱在260 nm、280 nm处无吸收，表明样品中无蛋白质和核酸等杂质； 利用粘度法测量知透明质酸相对分子量大小为100 KDa，红外光谱图显示其吸收峰和标准品基本相同； 总 结 总 结 总 结 罗非鱼眼透明质酸的提取纯化及特性分析 利用粘度法测量知透明质酸相对分子量大小为100 KDa，红外光谱图显示其吸收峰和标准品基本相同； 微波结合过氧化氢+抗坏血酸法降解HA的工艺条件为： 温度60 ℃、H2O2: Vc为1: 1、过氧化氢的添加量为2~4 mmol·mL-1、pH 4、30 min，最终可得到LMWHA相对分子量小于2 KDa；由LMWHA的红外光谱和紫外光谱可知，该降解工艺对HA的结构破坏较小； 总 结 罗非鱼眼透明质酸的提取纯化及特性分析 利用微波结合过氧化氢+抗坏血酸法制备分子量分别为小于5 KDa、5~10 KDa、10~30 KDa、30~60 KDa的LMWHA，体外抗氧化实验发现随着LMWHA分子量的减小其对DPPH的清除率以及还原力增大，而对?OH的清除率减小。其原因可能是LMWHA清除DPPH以及还原力的大小依赖于其糖环上双键的数量，而清除?OH能力大的大小则依赖于LMWHA链上羟基以及其螯合过渡金属离子的能力。 总 结 本研究优化了罗非鱼眼透明质酸的提取、纯化以及降解工艺，并比较了对不同分子量LMWHA的抗氧化能力，初步分析了其抗氧化机理，为罗非鱼眼HA的实际应用提供了一定的理论基础和技术支撑，由于时间和条件所限，今后的研究工作可以从以下几方面开展：研究时发现罗非鱼眼玻璃体含有较多蛋白，可对这些蛋白进行研究，以增大罗非鱼眼应用价值；本文对LMWHA抗氧化机理的研究还不够深入，其确切 机理还需要进一步的探讨；进一步开展水产品透明质酸在食品、化妆品、医药等方面的研究，扩大其应用价值 工作展望 攻读硕士期间发表的论文 发表论文4篇，出刊1篇，3篇在投，