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心肌收缩原理 * * 实验 三 蛙类离体心脏灌流 【实验内容】 1.学习斯氏离体蛙心灌流法。 2.了解心肌的生理特性。 3.观察Na+、K+、Ca2+及肾上腺素 (Adr)，乙酰胆碱(ACh) 等对离体心脏的影响。 【动物与器材】 蟾蜍、蛙心套管、套管夹、支架、双凹夹、滑轮、烧杯、常用手术器械、蛙板、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、滴管、培养皿、污物缸、纱布、棉线、任氏液、0.65% NaCl、5% NaCl、2%CaCl2、1% KCl、1:5000肾上腺、1:10000乙酰胆碱、300U/ml肝素。 【基本原理】 心肌具有自动节律收缩的特性，可用人工灌流的方法，观察心脏活动的规律及特点，还可用灌流液成分（ Na+、K+、Ca2+、肾上腺素、乙酰胆碱）的改变对离体心脏活动的影响。 Na+对心肌的影响 Ca2+对心肌的影响 K+对心肌的影响 ACh对心肌的影响 乙酰胆碱与心肌细胞膜M受体结合，提高心肌细胞膜K+通道的通透性，促使K+外流，将引起： ①窦房结细胞复极时K+外流增多，最大复极电位绝对值增大；衰减过程减弱，自动除极速度减慢。 ②复极过程中K+外流增加，动作电位2．3期短，Ca2+进人细胞内减少，使心肌收缩减弱；另一方面乙酰胆碱可直接抑制Ca2+通道，减少Ca2+内流，进而使心肌收缩减弱。 ACh对心肌的影响 ADR对心肌的影响 其机理为肾上腺素与心肌细胞膜的β受体结合，提高心肌细胞和肌浆网膜Ca2+通透性导致肌浆中Ca2+浓度增高，使心肌改缩增强。 另外，肾上腺素还有降低肌钙蛋白与Ca2+亲和力，促使肌钙蛋白对Ca2+的释放速率增加；提高肌浆网膜摄取Ca2+的速度，刺激Na+- Ca2+交换使复极期向细胞外排出Ca2+的作用加速,使心肌舒张速度增快，整个舒张过程明显加强。  【方法与步骤】 1. 双毁髓处死蟾蜍，并暴露心脏。 2. 心脏套管由动脉圆锥插入心室内。 3. 将离体心脏套管固定在支架上，连接实验装置。 4. (1) 记录正常心搏曲线。 (2) 改用0.65%NaCl 溶液灌流, 观察心搏变化。 (3) 加入2-6滴5%NaCl 溶液,观察心搏曲线变化。 (4) 加入1-3滴1%CaCl2 溶液,观察心搏曲线变化。 (5) 加入1-2滴1%KCl 溶液,观察心搏曲线变化。 (6) 加入1-2滴Adr(1:5000) 后观察心搏曲线变化。 (7) 加入1-2滴Ach(1:10000) 后观察心搏曲线变化。 4. 整理实验记录。 *