6-甲基-2-(α-羟甲基)-1H-苯并咪唑的合成、表征及分析应用.doc

综合性实验Ⅱ （届） 题 目 6-甲基-2-(α-羟甲基)-1H-表征及分析应用学 院 医药化工 专 业 班 级 学 号 学生姓名 指导教师 实验时间 2015.1.5--2015.1.9 6-甲基-2-(α-羟甲基)-1H-苯并咪唑的合成、表征及分析应用 1前言荧光分析法、分光光度法、共振光散射法和毛细管电泳法等。荧光法由于具有多种测定参数、选择性好、灵敏度高而倍受广大分析工作者的关注。但是，由于蛋白质本身的内源荧光很弱，用上述方法测定势必受到诸多限制。6-甲基-2-(α-羟甲基)-1H-苯并咪唑蛋白质，BSA对MHMBM的荧光增敏作用，2实验部分2.1 实验目的 通过本实验达到以下目的：了解6-甲基-2-α-羟甲基-1H-苯并咪唑用核磁共振仪可以记录到有关信号，处在不同环境中的氢原子因产生共振时吸收电磁波的频率不同，在图谱上出现的位置也不同 利用化学位移，峰面积和积分值以及耦合常数等信息，进而推测其在碳骨架上的位置。荧光分析法2.2 实验2.2.1合成原理： 2.2.2测定原理： 6-甲基-2-(α-羟甲基)-1H-苯并咪唑蛋白质，BSA对MHMBM的荧光增敏作用，2.3 实验仪器和试剂2.3.1合成： 仪器：IR日本岛津，FTIR-8400；NMR美国，Varian mercury Vx-200；数字熔点仪上海精密科学仪器有限公司，WRS-1B 试剂：l(A. R.)；无水乙醇(A. R.)；氢氧化钠(A. R.)。 2.3.2测定： 仪器：VARIAN Cary 荧光分光光度计(美国瓦里安公司)；低温恒温槽(宁波江南仪器厂)；Elix5+ Milli-QG超纯水系统 (美国Millipore公司)。 MHMBM溶液准确称取MHMBM 0.1000 g，用1000 mL容量瓶定容，此溶液浓度为100 μg/mL，使用时稀释至10 μg/mL牛血清蛋白(BSA，上海源聚生物科技有限公司，纯度98%，分子量68000)溶液：准确称取0.2518 g BSA，溶解后，转入250 mL容量瓶定容，此溶液的浓度为1007.2 μg/mL(于1-4冰箱中保存)，使用时稀释至100.72 μg/mL。 2. 实验方法 2.4.16-甲基-2-α-羟甲基-1H-苯并咪唑 2.4.1.1对甲基邻苯二胺（1）的合成 在250 mL三口烧瓶中，加入0 mL无水乙醇，4-甲基-2-硝基苯胺 g，然后加入0.3 g，，慢慢滴加 mL 80%水合肼，保持h，反应结束，趁热抽滤，mL95乙醇洗涤，抽干，将滤液浓缩，干燥得粉末状固体产率84%。2.4.1.2 6-甲基-2-α-羟甲基-1H-苯并咪唑（2）的合成 在250 mL口烧瓶中，依次加入 mL盐酸溶液1:1)， g 乙醇酸，对甲基邻苯二胺，少许沸石，加热回流3.5 h，将其冷却，转移入烧杯，滴加20% NaOH溶液调节pH =，pH =8～9，产生大量灰白色沉淀，冷却，静置，抽滤，洗涤，得色固体。将固体用4-甲基-2-硝基苯胺，干燥得白色粉末状固体.0 g，产率88%，mp 201.2℃ 2.4.2 6-甲基-2-(α-羟甲基)-1H-苯并咪唑荧光探针法测定蛋白质在8支10 mL比色管中各加入0.1 mL MHMBM溶液，分别在每支比色管中依次准确加入0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL BSA使用液，以超纯水稀释至刻度并摇匀。静置10 min后，在℃条件下，以λex/λem=/350nm为激发和发射波长，分别测定溶液的荧光强度，并以MHMBM空白溶液的荧光强度作参照，计算体系的ΔF，以ΔF对c(BSA)做回归分析。 同样条件下，试液荧光强度，根据线性方程计算样品溶液中的蛋白质含量。2.4.2.1　标准曲线与检出限 取8支10 mL比色管，分别加入0.1 mL MHMBM，按实验方法配制溶液并测定MHMBM的荧光强度变化。结果如表所示，根据数据绘制成的标准曲线。回归后的线性方程为：ΔF=，相关系数(r)为。取11支10 mL比色管，分别加入0.1 mL MHMBM，用超纯水定容，配制成空白溶液，测定溶液的荧光强度，标准偏差σn-1=，按3σ计算，方法的检出限为μg/mL，线性范围为μg/mL。　　 2.4.2.2试液中蛋白质含量测定 取6份0.1 mL MHMBM溶液于10 mL比色管中，分