体外培养条件下小鼠肝癌细胞株Hca-F+L-选择蛋白表达和淋巴道转移能力的变化.pdfVIP

体外培养条件下小鼠肝癌细胞株Hca．F L一选择蛋白表达与淋巴道转移能力的变化 硕士研究生：宫剑 指导教师：张嘉宁 教授 专业名称：生物化学与分子生物学 摘 要 肿瘤性疾病是威胁人类健康的三大杀手之一，其中，恶性肿瘤的 病人治愈最低勺、平均生存时间最短。而恶性肿瘤与良性肿瘤的区别在 于，前者通常发生转移，而后者不发生转移。因此，研究肿瘤的转移 机制具有重要意义。 选择蛋白作为细胞粘附分子中的一个家族，包括L．选择蛋白、P． 选择蛋白和E．选择蛋白，它们分别是存在于激活的血管内皮细胞、血 小板和白细胞表面的黏附分子。近年来已有大量的证据表明，选择蛋 白在肿瘤转移的过程中，可以介导经血液转移的肿瘤细胞与血小板及 血管内皮的粘附，促进肿瘤细胞的血道转移与扩散。 L．选择蛋白在大部分白细胞表面持续表达，如嗜中性粒细胞、单 核细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞，以及大部分的T和B淋巴细 胞，其正常功能是作为淋巴细胞到达外周淋巴结的归巢受体。在T细 胞杂交瘤中，转移到周围淋巴结的肿瘤细胞通常都有强的L-选择蛋白 的表达。在非何杰金淋巴瘤中，肿瘤细胞向周围淋巴结扩散被认为是 肿瘤细胞扩散的重要环节，转移到淋巴结中定植地非何杰金淋巴瘤细 胞表面有L．选择蛋白的表达，转移到周围组织中定植的淋巴瘤细胞表 面则几乎没有L．选择蛋白的表达。Qian等使用了致癌的转基因鼠模型， 通过注射肿瘤细胞，发现表达L．选择蛋白的肿瘤细胞才可以转移到周 围淋巴结。Borsig等研究发现，内源性表达于白细胞的L．选择蛋白能 够在体内影响肿瘤细胞的转移行为，L．选择蛋白的缺陷可以减弱结肠 癌的转移，并且在P一、L．选择蛋白双缺陷鼠体内进一步减弱，说明了 P一、L一选择蛋白在肿瘤转移中具有协同作用。 Hca细胞是我校凌茂英教授从Km小鼠腹水型肝癌细胞株H22中 分离出的只经淋巴道转移的细胞株，其中Hca．F为高转移株，接种于 615小鼠足垫后有高于80％的转移率，是研究肿瘤细胞经淋巴道转移的 理想模型。 我们实验室的前期工作表明：Hca．F细胞的上皮组织来源的特征性 标志物CK和肝癌细胞的特征性标志物AFP的免疫组化的反应结果均 成阳性，Hca．F细胞为上皮组织来源的肝癌细胞，而T淋巴细胞的表面 组化的反应结果均成阴性，排除了Hca．F细胞是T或B来源的淋巴瘤 胞和Hca．P细胞均有L．选择蛋白的表达，Hca．F细胞的表达高于Hca。P 细胞，同时L．选择蛋白的表达水平高低与Hca．P细胞和Hca．F细胞的 淋巴道转移潜能正相关。 本文选取小鼠肝癌细胞Hca．F为研究对象，以615小鼠为实验动 物，采用流式细胞术，分析了小鼠肝癌细胞Hca．F体外培养过程中L． 选择蛋白表达的变化，以及其表达水平与转移潜能高低的关系，探讨 了L．选择蛋白与肿瘤淋巴道转移力间的相关性。 本文的主要工作如下： 一．L．选择蛋白在小鼠肝癌Hca．F细胞体外培养过程中表达的变化 流式细胞术研究结果表明，Hca-F细胞由大、小两种亚群组成。L． 选择蛋白主要表达在Hca．F大细胞亚群的表面。在Hca．F细胞体外培养 过程中，第一、二、三代Hca-F培养细胞表面L．选择蛋白的阳性率、 荧光强度及其大细胞所占百分比、小细胞所占百分比都无明显变化。 Hca．F体外培养细胞从第四代起，其L．选择蛋白表达的阳性率、荧光强 度及其大细胞所占百分比都显著下降，小细胞所占百分比显著上升。 同时，把L．选择蛋白表达下降的第四、五、六代Hca．F体外培养细胞， 经注射回615小鼠腹腔后，再抽取腹水，获得的Hca．F细胞所表达的 ·2。 L-选择蛋白的阳性率、荧光强度及其大细胞所占百分比都显著回升， 小细胞所占百分比显著下降。 二．小鼠肝癌Hca-F细胞培养过程中其淋巴道转移潜能的变化 采用615小鼠足垫接种Hca-F细胞的淋巴道转移动物模型，探讨 了Hca．F细胞培养过程中其淋巴道转移潜能的变化。结果表明：第一、 二、三代Hca—F体外培养细胞其淋巴道转移能力无明显变化，淋巴结 转移率为90％左右，第四、五、六代Hca．F体外培养细胞其淋巴道转 移能力明显下降，淋巴结转移率为60％左右，在Hca．F细胞培养过程 中，第四、五、六代Hca．F体外培