N-乙酰半胱氨和亚硒酸钠对镉致大鼠肝肾损伤的影响及镉致293细胞凋亡影响因素的实验研究.pdf

N．乙酰半胱氨酸和亚硒酸钠对镉致大鼠肝肾损伤的影响 及镉致293细胞凋亡影响因素的实验研究 前 言 镉是重要的工业和环境污染物，镉在工业上应用广泛，在土壤、植物中 都有一定的蓄积，在人体的半减期又长达30年，再加上镉的慢性毒作用、致 癌、致衰老等机制尚未清楚，所以，对镉毒性的研究仍是重要的公共卫生学 问题。氧化损伤和细胞凋亡是镉毒性机制的重要组成部分，抗氧化剂N一乙 酰半胱氨酸和亚硒酸钠可能通过促进体内谷胱甘肽的合成和增强谷胱甘肽 过氧化物酶活性拮抗镉所致的氧化损伤，从而拮抗镉所致的肝肾损伤。氧 化应激反应产生活性氧自由基是细胞凋亡的重要诱因，此外细胞凋亡还与 和p53表达的变化和相互关系国内尚未见报道。镉所致氧化损伤、细胞凋 亡及其影响因素的研究对于镉中毒的预防、治疗和镉毒性机制研究都具有 重要意义。 本研究运用体内和体外实验，首先研究抗氧化剂N．乙酰半胱氨酸和亚 硒酸钠对镉所致急性、亚慢性肝、肾损伤的影响，其次研究N-乙酰半胱氨酸 和C鸽pase-3抑制剂对镉致细胞凋亡的影响以及镉致细胞凋亡过程中凋亡 53表达的变化，为镉毒性机制研究和镉中毒的预 相关基因Caspase-3和p 防、治疗提供实验依据。 材料与方法 1．N一乙酰半胱氨酸和亚硒酸钠对镉急性肝肾毒性的影响 氯化钠，第2组为单纯染镉组，皮下注射35叫kg的氯化镉溶液；第3、4 组大鼠以1mmo】／kg Na2Se03腹腔注射预处理后2h，再皮 NAC和10斗mol／kg 下注射35斗m出kg的氯化镉溶液。染毒24h后测定血清乳酸脱氢酶 丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—P】【)活性。 2．N．乙酰半胱氨酸和亚硒酸钠对镉亚慢性肝肾毒性影响的实验研究 将wistar大鼠32只，随机分成4组。第1组为对照组，皮下注射o．9％ 周。然后给干预组大鼠分别腹腔注射1Ⅱ皿oL／kgNAC溶液和10斗moL／kg亚 硒酸钠溶液，每周5d，连续2周；对照组和单纯染镉组在相应时间内注射 0．9％氯化钠。最后一次注射后24h，收集大鼠24h尿液，处死大鼠。测定 (LDH)活性及尿肌酐、尿蛋白和尿镉含量；测定肝、肾皮质中Cd、谷胱甘肽 (GsH)、丙二醛(MDA)含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH·P】【)活性。 3．NAC和z-DEVD-fmk对镉诱导293细胞凋亡的拮抗作用 h，Mtt法测细胞相 缸k预处理24h和1h，然后再以40肛moL／L氯化镉染毒24 对存活率，流式细胞术Ane)(in-V-PI双染法检测细胞凋亡百分率。 4．镉诱导293细胞凋亡与Caspase-3和P53表达关系的研究 h、 体外培养的转化人胚肾293细胞以40斗m彬L氯化镉分别染毒Oh、3 6h、12h、24 5mM NAc和lO陆M 化镉染毒24h，RT-PCR和Westem 式细胞术Anexin．V．PI双染法检测细胞凋亡百分率。 结 果 1．N．乙酰半胱氨酸和亚硒酸钠对镉急性肝肾毒性的影响 与对照组比较，单纯镉染毒组大鼠的血清LDH、GPT活性及肝肾镉含 量均显著升高，肝GSH、MDA含量显著升高，GSH-P】【活性显著下降。与单 纯镉染毒组比较，NAC预处理组的血清GPT和LDH活性显著降低，肝 GsH、MDA含量显著降低，肝、肾皮质镉含量显著降低；Na：Se0。预处理组血 ·2· 肾MDA含量显著升高。 2．N-乙酰半胱氨酸和亚硒酸钠对镉亚慢性肝肾毒性影响的实验研究 与对照组比较，单纯镉染毒组的肝、肾皮质和尿中镉含量显著升高，尿 ALP、NAG酶活性和尿蛋白含量显著升高，肝、肾皮质GSH含量显著升高， GsH-Px活性显著降低，肾MDA含量显著升高。与单纯镉染毒组比较，NAc 处理组的肾镉和尿镉含量均显著升高，尿NA